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韩春梅: 作品数：131 被引量：230H指数：8; 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学农业科学更多>>

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国内重组人粒细胞刺激因子理化对照品质量情况分析: 2020年; 目的分析评价国内12家生产企业重组人粒细胞刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)理化对照品的质量情况。方法对rhG-CSF理化对照品进行常规检测(包括生物学活性、蛋白质含量、比活性、非还原SDS-PAGE纯度、反相高效液相纯度、等电点、N-端氨基酸序列)和结构确证(包括质谱分子量、液质肽图、二硫键分析)。结果12家生产企业的rhG-CSF理化对照品比活性大致范围在(6.0~12.0)×10~7IU/mg;纯度均大于96.0%;等电点主区带均在5.8~6.6区间内;N-端氨基酸序列为MTPLGPASSLPQSFL或TPLGPASSLPQSFLL;经结构确证,其主体结构相同。结论国内各生产企业自行控制的rhG-CSF理化对照品总体质量良好,可对制品进行质量控制。; 刘兰史新昌韩春梅秦玺陶磊杨婧清范文红饶春明; 关键词：重组人粒细胞刺激因子结构确证

重组人白介素-15理化对照品的分析鉴定被引量：1: 2016年; 目的为了对产品质量进行有效的控制,根据《中国药典》要求,对重组人白介素^(-1)5理化对照品进行分析鉴定。方法参照2010年版《中国药典》三部,测定该样品的生物学活性、蛋白含量、纯度、等电点等指标;通过测定N-末端氨基酸序列、质谱相对分子质量与液质肽图,确证其一级结构。结果该样品的比活性为1.03×107IU·mg^(-1);蛋白含量为(0.879±0.065)mg·m L^(-1);非还原SDS-PAGE纯度为100.0%;分子排阻色谱纯度为100.0%;等电点测定结果为5.2;以上结果均符合质量标准要求。实测质谱相对分子质量(12 900.80)与理论值(12 900.71)一致;氨基酸序列与理论一致,氨基酸覆盖率100%;二硫键连接方式为Cys36-Cys86、Cys43-Cys89,与文献报道相符。结论该理化对照品质量合格、氨基酸序列正确,可用于白介素^(-1)5的常规质量控制。; 郭莹陶磊韩春梅杨靖清秦玺饶春明; 关键词：白介素-15 氨基酸序列二硫键

重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白质控方法和质量标准研究被引量：2: 2016年; 目的建立酵母表达的重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的质控方法和质量标准。方法采用荧光素酶报告基因法进行效价测定;分别用非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和分子筛液相色谱(SE-HPLC)测定纯度;反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行原液肽图分析;荧光定量PCR方法测定外源DNA残留量;液质联用技术分析重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白理化对照品的相对分子质量和氨基酸序列;其余检测项目按《中国药典》2010年版三部规定进行。结果用建立的方法对重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白3批原液、3批成品及1批理化对照品进行了质量控制研究,建立了针对该制品原液和成品的质量标准,原液和成品的检验结果均在质量标准控制范围内,符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》2010年版三部的要求;理化对照品质谱相对分子质量测定结果为71 361.0,与理论相对分子质量一致,氨基酸序列覆盖率达到97%。结论建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。; 韩春梅范文红陶磊饶春明; 关键词：高效液相色谱法

2012年重组人干扰素α2a评价性抽验结果与质量分析: 裴德宁付志浩杨靖清饶春明李永红郭莹丁有学韩春梅李响毕华范文红陶磊; 关键词：重组人干扰素Α2A 评价性抽验

重组人促红素理化对照品的质量评价被引量：4: 2017年; 目的:建立重组人促红细胞生成素的理化对照品的质量标准,对8家企业的促红素理化对照品进行质量评价。方法:用正常小鼠网织红细胞计数法测定体内生物学活性,使用LC-MS绘制质量肽图谱。色谱条件:采用BEH300 C4色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm),流动相为水(A)-乙腈(B)-1%甲酸水溶液(C),梯度洗脱(0~60 min,1%B→60%B,10%C;60~61 min,60%B→90%B,10%C;61~75 min,90%B→1%B,10%C),流速0.2 m L·min^(-1),柱温为40℃,样品保存温度为10℃,上样量5μL;质谱条件:MSE模式采集数据,毛细管电压3 000 V,Cone电压40 V,去溶剂气体温度350℃,源温120℃,去溶剂气体流速800 L·h-1,扫描范围m/z 50~2 000。确证一级结构,二硫键链接方式及糖基化位点;绘制N糖图谱,分析寡糖结构;用毛细管区带电泳分析异构体。采用压力进样3.45 k Pa;进样时间10 s,分离电压15.4 k V,分离时间80 min,检测波长214 nm。其余检测项目按中国药典2015年版三部方法进行。结果:建立的方法适合促红素理化对照品的检测,各样品的氨基酸序列均与理论一致;二硫键连接方式均为Cys7-Cys161、Cys29-Cys33;O-糖基化位点均为Ser126,N-糖基化位点均为Asn24、Asn38、Asn83;各样品的糖基修饰方式存在差异,不同糖型的相对比例不一致。等电聚焦结果为5~8条电荷异构体条带,不同样品的电荷异构体的组成比例有所差异,蛋白质含量、体内比活性、电泳纯度、液相纯度、等电聚焦、唾液酸含量、N端氨基酸序列、肽图结果均符合拟定的理化对照品质量标准。结论:建立了理化对照品的质量标准,不同企业的理化对照品质量总体稳定一致,但糖基化水平存在一定差异,分析比较了不同企业的促红素理化对照品在生物比活性,糖基化,异构体分布、电荷异质性等方面的差异。; 李响陶磊韩春梅范文红秦玺周勇饶春明; 关键词：重组人促红素

重组天花粉蛋白突变体质量标准的研究和建立被引量：3: 2006年; 目的：建立重组天花粉蛋白突变体（MTCS）的质量控制标准和检测方法。方法：用HL-60细胞株／MTT比色法定量测定MTCS体外生物学活性；用C4-HPLC和非还原型SDS—PAGE测定蛋白纯度；用毛细管电泳法测定等电点；用胰酶消化／RP—HPLC测定肽图；用还原型SDS—PAGE测定蛋白分子量等。结果：MTCS原液和成品对HL-60细胞的反应曲线与参考品的反应曲线一致，都呈现典型的S型曲线并且符合四参数方程式Y=（（A—D）／（1＋（X／C）^B））＋D，相关系数大于0．99；蛋白质纯度大于95．0％；等电点为9．16；蛋白原液的肽图与参考品肽图图形一致；分子量为2．72×10^4。结论：建立的MTCS质量控制标准和检测方法可以有效控制该制品的质量，并用于该制品的常规检定。; 韩春梅袁力勇饶春明李响丁有学郭莹王军志; 关键词：HL-60细胞株 HPLC 等电点

一种重组戊型肝炎疫苗抗原的一级结构分析被引量：4: 2014年; 目的:对一种重组戊型肝炎疫苗抗原的一级结构进行分析。方法:采用液质联用的方法测定其相对分子质量;采用变性剂使重组戊肝疫苗抗原的空间结构充分打开,用胰蛋白酶对其进行酶解,液质联用测定酶解后样品的液质肽图;结合质谱相对分子质量的测定及液质肽图的解析对其一级结构进行分析。结果:该抗原的氨基酸序列与理论一致,部分蛋白的N-末端缬氨酸存在乙酰化修饰,修饰率约为40%;链内唯一1个半胱氨酸处于还原状态,未参与链间二硫键的形成。结论:采用合适的酶解方法结合液质联用技术,对该疫苗抗原的氨基酸序列进行了确证,并对翻译后修饰进行了鉴定,所用方法可为其他重组疫苗抗原的一级结构分析提供参考。; 陶磊韩春梅饶春明王军志; 关键词：相对分子质量液质联用

重组抗血管生成素肽-Fc融合蛋白的质控方法和质量标准的建立被引量：1: 2013年; 目的建立重组抗血管生成素肽-Fc融合蛋白的质控方法和质量标准。方法分别采用分子筛高效液相色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SE-HPLC)、反相高效液相色谱(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)和还原毛细管电泳(reduced capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,rCE-SDS)测定3批重组抗血管生成素肽-Fc融合蛋白成品的纯度;采用AlphaScreen组氨酸检测试剂盒进行重组抗血管生成素肽-Fc融合蛋白受体配体结合试验测定效价;采用ELISA法进行鉴别试验;蛋白含量、pH值、渗透压摩尔浓度、Tween-20、不溶性微粒、外观、澄清度、生物学活性、水分、内毒素、无菌试验、异常毒性、渗透压等项目的检测按《中国药典》三部(2010版)规定进行。结果 SE-HPLC、RP-HPLC及rCE-SDS测定3批供试品的纯度分别为>98%、>80%和>99%;重组抗血管生成素肽-Fc融合蛋白对血管生成素(angiopoietin,Ang)与酪氨酸激酶受体(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains,Tie)结合的抑制作用呈剂量依赖性,3批供试品与标准品的剂量反应曲线相同,呈典型的倒S型,R2均>0.98,结合效价均在平均值的正负25%区间内;3批供试品的S/N值均>1.60;其他项目检测结果均符合《中国药典》三部(2010版)相关规定。结论建立的质控方法具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。; 范文红韩春梅李响毕华丁有学刘兰饶春明王军志

重组5型腺相关病毒基因组滴度测定用国家标准品的研制: 2023年; 目的研制重组5型腺相关病毒(recombinant type 5 adeno-associated virus,rAAV5)基因组滴度测定用国家标准品。方法对三质粒系统制备的rAAV5-GFP原液,按《中国药典》三部(2020版)相关要求进行鉴别、外观、pH、无菌、基因组滴度、纯度、感染滴度等检定,根据结果稀释、分装,制备成候选标准品;采用热加速试验对候选标准品进行稳定性考察;组织3家实验室,采用微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)法对候选标准品进行协作标定。结果候选标准品原液及候选标准品的各项检测指标均符合相关要求;在25、4、-20、-40、-80℃条件下,1、3、4、6个月基因组滴度均无明显下降;经3家实验室协作标定,候选标准品赋值为2.56×10^(12)copies/mL,95%置信区间为2.48×1012~2.64×10^(12)copies/mL。结论研制的rAAV5基因组滴度测定用国家标准品具有良好的稳定性,可用于rAAV5相关产品的质量评价。; 郑红梅于雷李永红史新昌安怡方郭莹韩春梅饶春明周勇; 关键词：国家标准品

RP-HPLC肽图比较量化方法: 目的:建立了一种肽图比较较量化方法。方法:将UV-HPLC的肽图抽象化,按照保留时间及其误差确定参比两图对应峰,并计算各峰峰高权重(f).以相关系数表示相似度(r);以1与决定系数(R2)差表示差异度.应用...; 史新昌罗立骏韩春梅李永红刘兰丁有学饶春明; 关键词：干扰素Α 统计分析; 文献传递

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