彭晓云
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
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- 半胱氨酸蛋白酶IdeS的原核表达、纯化及活性鉴定
- 2014年
- 酿脓链球菌来源的免疫球蛋白G降解酶(immunoglubulin G-degrading enzyme of Streptococcus pyogenes,IdeS)是一种典型的半胱氨酸水解酶,可以在抗体铰链区的特定位点进行酶切,使IgG水解为完整的F(ab)2片段和Fc片段,由于其独特的酶活特异性和高活性,IdeS可以作为工具酶应用于IgG的亚单位制备、结构分析及表征分析。利用双标签(GST-tag及His6-tag)表达系统在E.coli中高效表达了可溶性重组蛋白酶GST-IdeS-His6,并在IdeS的氨基端与GST之间加上肠激酶酶切位点,以利于标签的去除。再利用亲和层析的纯化方法对目的蛋白进行纯化。使用SDS-PAGE、HPLC-SEC、LC-MS对纯化后的IdeS进行分析和鉴定。结果表明:本系统所表达的蛋白酶IdeS得率高,每1L菌液纯化可获得约25mg纯度为90%以上的蛋白酶IdeS,将此蛋白酶与抗体IgG以1∶100(m/m)比例混合,于37℃反应30min,即可酶切完全。能够满足蛋白质结构分析中对蛋白酶的高质量要求,并且适用于抗体类药物的表征分析。同时,蛋白酶IdeS也可以应用于生物仿制药、生物改良药和新一代抗体以及Fc-融合蛋白的研究。
- 许静赵自叶徐进郭怀祖郑娟段树燕彭晓云王皓
- 关键词：原核表达纯化
