秦海艳
- 作品数：12 被引量：62H指数：4
- 供职机构：兰州生物制品研究所更多>>
- 发文基金：江苏省高校重点实验室开放研究课题江苏省教育厅自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- 冻干人血浆补体的制备及其稳定性被引量：3
- 2016年
- 目的制备冻干人血浆补体,并观察其在4种不同保存温度条件下的稳定性。方法制备3批冻干人血浆补体,将每批样品分别保存在-70、4、25和37℃条件下,采用补体50%溶血试验测定于-70和4℃条件下保存第1、15、30、60、90、120、180、270、365天以及于25和37℃条件下保存第1、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120天的CH_(50);细胞增殖-毒性检测法测定补体对抗CD_(20)抗体CDC活性检测的影响。结果-70和4℃保存的3批冻干人血浆补体,1年内CH_(50)平均下降了19.5%和36.3%,25和37℃保存的3批冻干人血浆补体,3个月CH_(50)平均下降了53.4%和60.7%。与上市补体和CH_(50)为30 U/ml的冻干人血浆补体相比,CH_(50)为15 U/ml的冻干人血浆补体对抗CD_(20)抗体CDC活性检测结果无影响。结论在-70和4℃条件下保存的冻干人血浆补体的CH_(50)相对较稳定,但随着保存温度的升高,CH_(50)下降有加速的趋势。CH_(50)大于15 U/ml的冻干人血浆补体可用于治疗性抗体CDC活性检测。
- 秦海艳熊颖乔玉玲陈继军安晨毛晓燕
- 关键词：血浆冷冻干燥补体稳定性
- 马波沙星人工抗原的合成及其免疫原性的鉴定被引量：7
- 2018年
- 合成、鉴定了马波沙星（MBF）人工抗原,为马波沙星单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。以牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）为载体蛋白,采用碳二亚胺法分别合成马波沙星免疫抗原（MBF-BSA）和包被抗原（MBF-OVA）,并使用紫外分光光度法、SDS-PAGE、ELISA方法鉴定人工抗原合成效果。初步鉴定结果显示,MBF-BSA与MBF-OVA均偶联成功;用免疫抗原MBF-BSA免疫小鼠,经ELISA方法检测,五免后血清中抗体效价可达1∶5.12×105,半数抑制率为90.20 ng/m L。研究表明,马波沙星人工抗原合成成功,其免疫抗原具有良好的免疫原性,免疫小鼠可获得高效价、高特异性多克隆抗体。
- 汝晓飞张伟王兴秦海艳周小钰侯珂刘若璇蔡云虹王捍东
- 关键词：人工抗原免疫原性兽药残留
- 抗头孢氨苄单克隆抗体的制备与初步应用被引量：2
- 2017年
- 为制备抗头孢氨苄(cephalexin,CEX)的单克隆抗体并建立鲜奶中CEX残留检测的ELISA方法,本试验采用戊二醛两步法分别将CEX与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联,用合成的CEX-BSA作为免疫原免疫BALB/c雌鼠;5次免疫后,应用杂交瘤细胞融合技术建立并筛选出两株(2G4、5B3)分泌抗CEX单克隆抗体(monoclonal antibodies,McAb)的杂交瘤细胞株,将2G4细胞株注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水,并对腹水进行纯化及鉴定。结果显示,2G4腹水效价大于1∶1.28×10~5,其抗体亚型为IgG2b(κ),亲和力常数K=1.51×10~9 L/mol;交叉试验结果显示,该单克隆抗体除了与头孢拉定有52.55%的交叉反应率外,与头孢噻呋、头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻吩、青霉素、链霉素、四环素均无明显交叉反应;建立了测定鲜奶样品中CEX的ELISA方法,线性范围为20~1 000ng/mL,线性方程y=0.4674x-0.5359(R^2=0.9909),检测下限为19.68ng/mL,平均回收率为91.31%,平均变异系数低于15%,低于中国及欧盟规定的头孢氨苄最高残留限量,具有一定的应用前景。
- 张伟王兴刘金萍徐声乐秦海艳刘若璇蔡云虹汝晓飞侯珂王捍东
- 关键词：单克隆抗体头孢氨苄ELISA人工抗原
- 单链抗体的研究进展被引量：18
- 2011年
- 单链抗体即单链抗体可变区片段(single-chain antibody variable fragment,or ScFv)是由抗体重链可变区和轻链可变区通过一段10-25个氨基酸的连接肽连接而成,其分子质量小,穿透力强,特异性好,免疫原性低,在免疫学和医学方面得到了广泛应用。本文就单链抗体的结构设计、展示系统、表达和应用方面做一综述。
- 秦海艳毛晓燕乔玉玲李晓进赵红
- 关键词：单链抗体
- 人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库的构建及筛选被引量：4
- 2012年
- 目的构建人源抗狂犬病病毒单链抗体(Single-chain fragment variable,scFv)噬菌体抗体库,并进行筛选。方法以接种过狂犬病疫苗的21份高效价的健康人外周血为原料,提取淋巴细胞总RNA,PCR扩增VH、Vκ、Vλ基因,重叠延伸PCR扩增获得scFv基因,克隆入噬菌粒pS100,电转化E.coli TG1,建立scFv初级抗体库,并进行基因序列分析及鉴定。以灭活的狂犬病病毒为抗原,进行3轮scFv噬菌体抗体库的富集筛选,随机挑取单克隆,制备噬菌体抗体颗粒,并进行ELISA分析,阳性克隆进行序列分析,采用快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescent facus inhibition test,RFFIT)检测噬菌体抗体颗粒的中和活性。结果获得了库容为1.7×108的人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,该抗体库具有较好的序列正确率和多样性,经3轮筛选后,ELISA分析显示,共获得24个序列各不相同的针对狂犬病病毒的阳性克隆,对其中7个克隆的噬菌体抗体颗粒进行RFFIT检测,均具有中和活性。结论已成功构建了人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,并建立了筛选方法。
- 毕司英毛晓燕陈继军秦海艳
- 关键词：狂犬病病毒噬菌体展示技术抗体库
- 重组抗狂犬病病毒抗体在HEK293 EBNA1细胞中的瞬时表达优化被引量：4
- 2015年
- 目的:优化重组抗体在悬浮无血清培养的HEK293 EBNA1瞬时表达,提高重组抗体表达量。方法:将HEK293 EBNA1细胞适应于无血清悬浮培养,筛选适宜的无血清培养基。使用PEI转染质粒进入细胞,瞬时表达重组抗体;使用Modde软件进行实验设计(DOE),优化转染质粒量、轻重链比例、PEI量等影响瞬时表达的条件。培养上清经亲和纯化,获得目标抗体,用快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)测定抗体活性,用BCA法测定纯化抗体浓度。结果:293SFMII为适宜的HEK293 EBNA1细胞无血清悬浮培养基。对抗体表达影响最大的因素是轻重链比例(P=0.00000),其次为质粒浓度(P=0.00086),最后为PEI(P=0.00257)。优化的转染条件为:质粒用量0.61μg/106细胞,轻重链比例2:1,PEI 2.67μg/106细胞,优化后抗体表达量有显著提高(P=0.007)。结论:通过DOE优化获得了重组抗狂犬病病毒抗体的高水平表达,抗体表达量提高了至少50倍。
- 陈继军秦海艳安晨乔玉玲李晓进毛晓燕
- 关键词：HEK293EBNA1
- 食品中偶氮类合成色素的检测方法研究进展被引量：3
- 2015年
- 食品在加工的过程中容易丢失原本的颜色,食品加工者为了使食物看起来更美味,向其中添加廉价的合成色素。而在许多国家因该色素可能存在对人体的危害,禁止在食品中添加偶氮类合成色素,并严格监管该类食品在国内的流通及进出口,监管部门采用高灵敏度和高选择性的分析方法进行监测,以确保食品的质量安全。本文将介绍食品行业中对于添加偶氮类合成色素的各种分析技术,并对不同的提取方法做了简要的描述。
- 王兴刘金萍张伟刘若璇秦海艳蔡云虹汝晓飞王捍东
- 关键词：偶氮色素固相萃取
- 3种不同Protein A亲和层析填料纯化抗CD52单克隆抗体的比较被引量：3
- 2021年
- 目的比较3种Protein A亲和层析填料MabSelect SuRe、Protein A Diamond及UniMab 50纯化抗CD52单克隆抗体的载量及纯化效果。方法将浓度为1.24 mg/mL的抗CD52单克隆抗体分别流经3种Protein A亲和层析填料,确保保留时间一致,检测流穿液的抗体浓度,以流穿液中抗体浓度达10%上样浓度时的上样量确定填料的最大动态载量。3种填料均按80%最大载量上样,纯化3批抗CD52单克隆抗体培养上清样品,比较洗脱体积、抗体回收率及洗脱收集液中抗体浓度、抗体纯度、电荷异质性、宿主蛋白残余量、宿主DNA残余量、填料配基Protein A脱落量。结果填料MabSelect SuRe与Protein A Diamond在载量、宿主蛋白残余量、填料配基Protein A脱落量方面接近;在抗体纯度、电荷异质性、宿主DNA残余量方面,3种填料表现相当;在抗体回收率、洗脱体积及抗体浓度方面,UniMab 50表现最佳。结论 3种填料亲和纯化抗CD52单克隆抗体的效果各有优劣,但均可满足该纯化步骤的要求,可根据实际工艺状况及质控要求进行选择。
- 南建军秦海艳宋宪铭安晨宋兰兰赵晓瑞陈继军
- 关键词：载量
- 罗丹明B及其在食品中检测方法研究进展被引量：10
- 2015年
- 罗丹明B(Rhodamine B,RB)是一种具有鲜桃红色的人工合成的三苯甲烷类碱性染料,曾经用作食品添加剂,但后来实验证明RB具有潜在的毒性、致癌和致突变性,现我国和欧盟等都不允许在食品中添加。本文对RB的性质、危害及其国内外对RB样品前处理和检测方法的研究进展做了介绍。
- 徐声乐王兴刘金萍张伟秦海艳刘若璇蔡云红王捍东
- 关键词：罗丹明B食品添加剂样品前处理
- 罗丹明B单克隆抗体的制备及初步鉴定
- 2016年
- 采用N-羟基琥珀酰亚胺活性脂（NHS）法将罗丹明B（Rhodamine B,RB）与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）分别偶联形成免疫原和检测原,经紫外分光光度计扫描鉴定初步判断偶联成功。以人工合成免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了3株稳定分泌针对RB抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2D1、4C3和7F11,将7F11注入BALB/c小鼠腹腔产生腹水,用所得到的腹水建立了间接竞争ELISA（ic ELISA）标准曲线。对ic ELISA的工作条件进行了优化,方阵试验确定了包被抗原的工作浓度为1∶2 000,腹水抗体的工作浓度为1∶64 000。利用RB作药物抑制标准曲线,其线性方程为y=0.2848x-0.2847（R2=0.9924）,线性范围为1-1 000 ng/m L,最低检测浓度为1 ng/m L。交叉试验表明,该单抗与RB的抑制率为100%,与罗丹明6G、罗丹明123、苯酚红、副品红、中性红、曙红Y、橙黄Ⅱ、甲基橙、结晶紫均无交叉反应。
- 徐声乐李道云王兴刘金萍刘云迎张伟秦海艳刘若璇蔡云红王捍东
- 关键词：单克隆抗体罗丹明BELISA
