李涛
- 作品数：3 被引量：11H指数：3
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ADAM12基因表达沉默对CD133阳性胶质瘤细胞自我更新能力的影响被引量：4
- 2016年
- 目的研究解整合素-金属蛋白酶12(a disintegrin and metalloprotease 12,ADAM12)基因表达沉默抑制CD133阳性(CD133+)胶质瘤细胞的自我更新能力。方法采用sh RNA重组慢病毒转染技术沉默胶质瘤U87细胞系ADAM12基因表达分为ADAM12基因表达干扰序列组(sh RNA-ADAM12)、阴性对照组(sh RNA-NC)及空白对照(sh RNA-C)组。通过Western blotting以及Real-time PCR验证各组细胞ADAM12表达情况;采用悬浮培养得到胶质瘤细胞球以富集CD133+的胶质瘤细胞;并通过免疫荧光染色技术检测ADAM12与CD133在细胞球与贴壁细胞的表达情况;通过神经肿瘤球形成实验检测三组细胞的自我更新能力;利用Western blotting分别检测三组细胞成球后未分化或分化相关蛋白CD133、GFAP及TUBB3以及Notch通路靶基因Hes1的蛋白表达情况。结果慢病毒转染技术可显著下调U87胶质瘤细胞ADAM12的m RNA及蛋白的表达量,sh RNA-ADAM12组与sh RNA-NC组较sh RNA-C组m RNA的相对表达量为0.22±0.03与0.98±0.06(F=425.37,P<0.01);三组ADAM12蛋白的相对表达量分别为28.72%±2.36%、69.21%±3.92%及69.04%±3.57%(F=145.42,P<0.01);免疫荧光染色显示细胞球中ADAM12与CD133表达量明显高于普通细胞;神经肿瘤球形成实验结果显示,三组成球数分别为45.5±2.3、104.2±5.8以及109.6±6.2,与sh RNA-NC组及sh RNA-C组相比,sh RNA-ADAM12组的成球能力明显降低,差异具有统计学意义(F=147.03,P<0.01)。sh RNA-ADAM12组与sh RNA-C组相比,GFAP与TUBB3蛋白表达量分别上调约166%与146%,CD133与HES1的蛋白表达量分别下调了54%与50%,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 ADAM12基因表达沉默可能通过抑制Notch通路活性降低CD133+胶质瘤细胞的自我更新能力。
- 刘波杨学军张辰于圣平林雨海龙周星辰李帅李涛王伟程铖杨亦寒
- 关键词：解整合素-金属蛋白酶12自我更新
- Notch1通路活化对胶质瘤干细胞迁移和侵袭能力的影响被引量：7
- 2016年
- 目的观察Notch1通路活化对胶质瘤干细胞（GSCs）迁移和侵袭能力的影响并探讨其潜在机制。方法将U87胶质瘤细胞置于干细胞培养基中悬浮培养，使用免疫磁珠法分选获得CD133阳性的胶质瘤细胞，免疫荧光染色检测CD133及巢蛋白鉴定GSCs。将携带Notch1抑制物核苷酸序列（shRNA-Notch1）、阴性对照核苷酸序列（shRNA-NC）的重组慢病毒转染至体外培养的U87来源的GSCs中，分别作为shRNA-Notch1组、shRNA-NC组，同时设不做处理的空白对照组，在成球后行通过荧光定量PCR检测3组细胞Nowh1 mRNA的表达；Western blotting检测3组细胞Notch1、Hesl、Akt、pAkt、mTOR、pmTOR蛋白的表达；Transwell细胞迁移和侵袭实验观察3组细胞迁移和侵袭能力的强弱。结果免疫荧光染色检测显示肿瘤细胞球阳性表达神经干细胞标志物CD133和巢蛋白。与shRNA-NC组和空白对照组相比，shRNA-Notch1组GSCs的Notch1 mRNA和蛋白、pAkt、mTOR、pmTOR蛋白表达降低，差异有统计学意义（P〈0．05），而Akt蛋白水平没有明显变化，差异无统计学意义（P〉0．05）。Transwell迁移及侵袭实验均显示与shRNA-NC组和空白对照组相比．shRNA-Notch1组穿膜的细胞数目降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论抑制Notch1通路活性后可能通过PI3K通路来调节GSCs的迁移和侵袭能力。
- 周星辰海龙张辰刘波李帅林雨王伟李涛杨亦寒程铖于圣平杨学军
- 关键词：胶质瘤干细胞NOTCH1细胞迁移细胞侵袭
- NSC23766、Y-27632对3D水凝胶中胶质瘤细胞侵袭迁移及整合素表达的影响被引量：4
- 2017年
- 目的观察分别及联合抑制Rac及Rho通路后3D水凝胶中恶性胶质瘤细胞的侵袭迁移运动形式与整合素表达的变化。方法应用脂质体介导pCMVLifeAct—TagGFP2质粒转染U87细胞．将转染后细胞分为NSC23766处理组、Y-27632处理组、NSC23766和Y-27632联合处理组、空白对照组．前3组分别加入100nmol／mLNSC23766、10nmol／mLY-27632、100nmol／mLNSC23766＋10nmol／mLY-27632，空白对照组加入等量培养基。将4组细胞在水凝胶中进行3D培养，共聚焦显微镜观察4组中类圆形细胞、梭形细胞的组成及间质运动和变形虫运动形式的转换；将接种了4组细胞的水凝胶注入细胞趋化载玻片中，于活细胞工作站观察4组细胞的侵袭迁移运动形式并计算运动速度、运动距离：免疫荧光染色观察4组细胞整合素αVβ3的表达。结果3D水凝胶培养的U87细胞具有类梭形、类圆形2种形态，相应地表现为间质运动和变形虫样运动形式。与空白对照组比较，NSC23766处理组中类圆形细胞所占比例较高，Y-27632处理组中梭形细胞所占比例较高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。NSC23766处理组细胞的间质-变形虫运动（MAT）转换率为50．0％，Y-27632处理组变形虫一间质运动（AMT）转换率为42．8％。趋化实验结果显示NSC23766处理组、空白对照组、Y-27632处理组、NSC23766和Y-27632联合处理组细胞的运动速度和运动距离依次降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫荧光染色检测显示Y-27632处理组细胞整合素αVβ3表达显著高于其他3组．空白对照组细胞整合素αVβ3表达显著高于NSC23766处理组和联合处理组。结论3D水凝胶可以作为U87细胞培养及三维形态观察的良好基质，Racl与RohA通路靶向抑制剂的联合应用可作为控制脑胶质瘤播散的策略。
- 黄玉宝童鹿青张辰海龙李涛王伟于圣平谢祎杨学军
- 关键词：神经胶质瘤3D模型水凝胶靶向治疗
