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李超龙

作品数:2 被引量:1H指数:1
供职机构:中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
发文基金:江苏省“333工程”培养资金资助项目江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 2篇中文期刊文章

领域

  • 2篇医药卫生

主题

  • 2篇猪链球菌
  • 2篇链球菌
  • 2篇2型猪链球菌
  • 1篇多克隆
  • 1篇多克隆抗体
  • 1篇原核表达
  • 1篇天冬氨酸激酶
  • 1篇重组蛋白
  • 1篇温度
  • 1篇酶活性
  • 1篇酶活性测定
  • 1篇抗体
  • 1篇克隆
  • 1篇纯化
  • 1篇FTSZ

机构

  • 2篇中国人民解放...
  • 1篇中国药科大学
  • 1篇温州医科大学

作者

  • 2篇张剑
  • 2篇王长军
  • 2篇潘秀珍
  • 2篇范伟伟
  • 2篇孙卫平
  • 2篇李超龙
  • 2篇吴倩倩
  • 1篇高基民
  • 1篇倪华

传媒

  • 1篇中国人兽共患...
  • 1篇中国病原生物...

年份

  • 2篇2017
2 条 记 录,以下是 1-2
排序方式:
2型猪链球菌FtsZ重组蛋白的制备及其酶活性测定
2017年
目的制备2型猪链球菌丝状温度敏感蛋白(Filamentous temperature-sensitive protein Z,FtsZ)重组蛋白并测定其水解三磷酸鸟苷(GTP)的酶活性。方法从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组中PCR扩增目的基因ftsz,构建重组表达质粒pET28a-ftsz,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,Ni 2+亲和层析柱纯化重组蛋白,Western blot分析。重组蛋白免疫新西兰兔后收集多抗血清,间接ELISA法检测抗体效价,用孔雀绿-磷酸检测法测定FtsZ重组蛋白的GTP酶活性。结果成功构建pET28a-ftsz重组表达质粒;纯化获得大量纯度较高的FtsZ重组蛋白;ELISA检测兔多抗血清效价达1∶13 107 200;Western blot显示FtsZ重组蛋白能够与His-Tag单抗和兔多抗血清发生反应;以GTP为底物检测重组蛋白具有GTP酶活性。结论成功制备了具有GTP酶活性的2型猪链球菌FtsZ重组蛋白并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究2型猪链球菌FtsZ在细胞分裂调控过程中的作用奠定基础。
范伟伟倪华孙卫平张剑李超龙吴倩倩王长军潘秀珍
关键词:2型猪链球菌纯化
2型猪链球菌天冬氨酸激酶的原核表达及抗原性检测被引量:1
2017年
目的原核表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)并检测其免疫原性。方法对S.suis 2中国强毒株05ZYH33的AK编码基因05SSU1811进行生物信息学分析并设计引物,通过PCR从05ZYH33基因组中扩增目的片段。将目的基因克隆入原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3)后采用IPTG诱导表达目的蛋白,用His亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。用纯化的重组AK免疫BALB/c小鼠4次,采血,分离血清,采用间接ELISA检测抗体效价,并进行Western blot分析。结果构建的重组质粒在宿主菌中高效表达目的蛋白,His亲和层析柱纯化的重组蛋白,能与感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应。ELISA检测重组AK免疫鼠血清抗体效价为1∶102 400,Western blot显示该抗血清能与重组蛋白反应。结论成功制备重组AK蛋白,该蛋白具有抗原性,为进一步研究AK在S.suis 2致病过程中的作用奠定了基础。
孙卫平吴倩倩范伟伟张剑李超龙王长军潘秀珍高基民
关键词:2型猪链球菌原核表达天冬氨酸激酶多克隆抗体
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