薛昌华
- 作品数：4 被引量：24H指数：2
- 供职机构：四川出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学环境科学与工程更多>>
- 鲤疱疹病毒2型ORF5截短基因的克隆表达及免疫原性研究被引量：8
- 2016年
- 根据G en Bank上已登录的鲤疱疹病毒2型的O RF5基因序列(登录号:AFJ20457.1)设计1对引物,采用PCR扩增技术获得目的基因。序列分析表明,目的基因长357 bp,是一个完整的开放阅读框,编码119个氨基酸,理论分子质量为13 059.70 u,无信号肽,无跨膜区,含有4个抗原表位。将扩增片段克隆至原核表达载体p ET-32a中,并将获得的重组质粒转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达。对表达蛋白进行复性纯化后免疫小鼠和异育银鲫,SD S-PAGE和W estern-blot检测分析表明,重组蛋白的分子质量约为33 ku,与预期相符,表达形式为包涵体,该蛋白能够与抗H is标签的抗体发生特异性反应,也能识别病毒粒子上的ORF5蛋白。对免疫的异育银鲫进行攻毒,结果显示注射生理盐水组的银鲫保护率为0,注射15、25、50 g重组蛋白组的保护率分别为20%、30%、35%,表明免疫重组蛋白组的保护率高于对照组。本研究证实了表达的融合蛋白具有一定的免疫原性,丰富了鲤疱疹病毒2型ORF5基因及基因组的研究,为研发制备新型鲤疱疹病毒2型的疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。
- 廖红林华郝中香佘容陈世界杨苗陈珍容薛昌华赵珊韩国全曹三杰颜其贵
- 关键词：克隆表达攻毒保护试验
- TaqMan荧光定量PCR监测野猪乙型脑炎病毒被引量：2
- 2015年
- 为了更有效地保护野猪资源,评估其作为种质资源的安全性及人类驯养的风险性,采用Taq Man荧光定量PCR监测野猪乙型脑炎病毒的携带情况。结果显示,Taq Man荧光定量PCR敏感性是常规PCR检测方法的100倍,检测时间缩短了1/2。重复性试验中,批内及批间变异系数均低于2%。对40份家养野猪血液样品进行检测,Taq Man荧光定量PCR的阳性检出率为10%,国标(GB/T 22333-2008)中RT-PCR的阳性检出率为5%,灵敏度显著提高。表明该方法可用于野猪乙型脑炎的实时监测和流行病学调查,同时也为野猪群乙型脑炎的净化奠定基础。
- 赵珊林华陈世界杨苗薛昌华郝中香王彬文彩芳颜其贵
- 关键词：野猪乙型脑炎病毒
- 养殖池塘底泥水体中适用于TaqMan荧光定量PCR的不同DNA提取方法
- 2016年
- 通过人工模拟即在养殖池塘底泥和水样中加入阳性组织处理样品,对人工模拟的底泥样品分别采用磁珠法、酚氯仿法以及吸附柱法进行核酸提取,结果发现底泥含量对磁珠法和吸附柱法病毒DNA提取效果影响较小,而对酚氯仿法病毒DNA提取效果影响较大,且底泥含量较少提取相对较好。3种病毒DNA提取方法中采用混样提取核酸的效果均好于用上清液提取的效果。吸附柱法和磁珠法对病毒DNA提取效果较接近且明显好于酚氯仿法。通过对不同浓度的PEG6000进行浓缩后提取核酸,结果发现原始水样中未检测到Cy HV-2或其含量极低未达到检测限。PEG6000浓度为13%时,核酸浓缩提取效果最佳。本研究为实时监测养殖池塘中的底泥和水体中是否存在病毒提供了一种参考方法,从而更好地维护水产养殖环境的生态安全和促进我国水产养殖业健康可持续发展。
- 佘容郝中香罗丹林华张凤枰廖红陈世界刘耀敏杨苗薛昌华赵珊颜其贵
- 关键词：DNA提取
- 鲤疱疹病毒2型微滴式数字PCR快速检测方法的建立被引量：16
- 2016年
- 根据GenBank上登录的鲤疱疹病毒2型(cyprinid herpesvirus 2,Cy HV-2)ORF6基因序列(登录号:JQ815364.1)用Primer Express 3.0设计并合成ORF6基因特异性引物及Taq Man探针,建立了检测鲤疱疹病毒2型的微滴式数字PCR(dd PCR)方法。结果显示,dd PCR的检测灵敏度比qPCR高5倍。特异性和重复性检测结果表明,ddPCR和qPCR均具有良好的特异性和较高的重复性。qPCR和dd PCR标准曲线的r2值分别为0.999 2和0.997 5,表明ddPCR和qPCR均具有良好的线性关系。研究结果表明,该方法可以对CyHV-2进行可靠的检测,可以满足CyHV-2特性研究和感染诊断的需要。对60份临床样品的检测结果显示,在检出阳性的34份样品中,包含肾、脾、腮、肝、心和脑,表明该病毒在这些器官均有分布,其中肾的病毒含量相对最高,脑的病毒含量相对最低。总之,本研究建立的ddPCR方法灵敏度高、特异性强、能快速检测到极低含量的病毒,适用于CyHV-2的快速检测和病原流行病学调查。
- 郝中香林华佘容廖红陈世界杨苗薛昌华赵珊韩国全颜其贵
