郭韬
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：辽宁医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新型表达骨形态发生蛋白2腺病毒真核细胞载体的构建和鉴定
- 2009年
- 目的构建同时表达具有抗原表位FLAG标记的骨形态发生蛋白2(BMP2)目的蛋白和报告分子绿色荧光蛋白(GFP)的新型腺病毒真核细胞表达栽体。方法将去除翻译终止密码子并添加新的酶切识别位点Xho I的BMP2基因定向连入腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-IRES-hrGFP-1。携带BMP2^+基因的重组腺病毒穿梭质粒经酶切鉴定、Pme I酶切线性化后转化BJ5183-AD-1大肠杆菌,利用细菌内同源重组机制将BMP2+和GFP基因连同其顺势表达元件重组入腺病毒基因组质粒。用Pac I酶切去除其质粒成分,暴露腺病毒基因组的反向末端重复序列,转染293细胞,进行腺病毒的包装,完成新型腺病毒载体Ad CMV-BMP2+-IRES-GFP-1的构建。作为阳性对照,同时制备多年来广为应用的BMP2腺病毒表达载体Ad CMV-BMP2。以两种载体感染骨髓基质细胞,通过RT-PCR和荧光显微镜分别检测骨形态发生蛋白2和绿色荧光蛋白表达情况;通过碱性磷酸酶活性检测判断BMP2诱导成骨分化作用。结果突变后骨形态发生蛋白2基因序列、重组腺病毒穿梭质粒和重组腺病毒质粒酶切图谱符合预定设计。感染骨髓基质细胞后,新型腺病毒载体可同时表达报告分子GFP和具有诱导成骨分化活性的BMP2。结论成功构建表达BMP2的新型腺病毒载体。
- 张正刘丹平陈峻江郭韬张男
- 关键词：绿色荧光蛋白腺病毒载体同源重组成骨诱导
- 骨髓间充质干细胞中突变型人低氧诱导因子1α真核表达载体的表达被引量：1
- 2011年
- 背景:转基因小鼠体内实验证实,重组的低氧诱导因子1α可以促进皮肤形态功能正常的血管新生。目的:构建能够在常氧条件下同时表达突变型低氧诱导因子1α目的蛋白和绿色荧光蛋白报告分子的新型腺病毒真核表达载体,并转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,检测该基因在细胞中的表达情况。方法:利用Lipofectamine2000介导将构建成功的重组腺病毒真核表达载体pAd-HIF1αmu-IRES-hrGFP-1转染HEK293A细胞,包装病毒,以最佳感染指数=50将重组腺病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞,并设3个对照组,即阳性对照组:转染Ad-CMV-HIF1α-IRES-hrGFP-1;阴性对照组:转染Ad-CMV-IRES-hrGFP-1组;空白组:未转染病毒。结果与结论:①腺病毒载体成功转染HEK293A细胞,包装成功,细胞内有大量绿色荧光表达。②转染突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体的细胞在常氧条件下蛋白表达量明显高于转其他3组,3个对照组间差异无显著性意义(P>0.05)。提示突变型腺病毒真核表达载体Ad-HIF1α-IRES-hrGFP-1在HEK293A内成功包装;突变后低氧诱导因子1α基因能够在常氧条件下大量且高效表达。
- 张男李谌郭韬刘丹平
- 关键词：低氧诱导因子1Α重组腺病毒载体骨髓间充质干细胞转染
- 诱变型低氧诱导因子1α腺病毒载体的构建及常氧表达
- 目的:为了在常氧条件下研究低氧诱导因子1α(HIF1α)在骨缺损部位促新血管生成作用,构建能够同时表达突变型HIF1α和人源化绿色荧光蛋白(hrGFP)的腺病毒载体并检测其在兔骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达。方法:...
- 刘丹平李谌郭韬张男
- 关键词：低氧诱导因子1Α重组腺病毒载体骨髓间充质干细胞
- 文献传递
