余志武
- 作品数：4 被引量：20H指数：3
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项广东省高等学校珠江学者岗位计划广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SASR-CoV核衣壳蛋白在杆状病毒-昆虫系统的克隆表达及抗原性分析被引量：1
- 2014年
- 目的:SARS冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白(N蛋白)在杆状病毒-昆虫系统的表达,研究其抗原性。方法:利用PCR方法扩增SARS-NP全长基因,使用BamHⅠ和SalⅠ限制性内切酶定向插入Bac-to-Bac系统的pFastBac HTC载体,构建重组质粒转化DH10Bac细胞,获得重组杆粒DNA后转染Sf9细胞,在High Five细胞中表达SARS-NP;表达产物经NiNTA亲和层析纯化及免疫印迹和ELISA方法验证抗原性。结果:成功构建pFastBac HTC-SARS-NP重组质粒,并在High Five细胞高效表达,获得相对分子量约48 kD的重组蛋白质。经验证,重组蛋白能被SARS-CoV NP的特异性单抗(8E1A17)和兔免疫血清识别,能与SARS患者血清反应,与健康人血清、人冠状病毒229E型和OC43型的杂交瘤培养上清、相对应的兔免疫血清、患者血清均无交叉反应,具良好抗原反应性。结论:SARS-NP成功表达于杆状病毒-昆虫系统,具较强抗原反应性,初步认为其与229E型和OC43型感染血清无交叉反应性。
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- 关键词：核衣壳蛋白杆状病毒抗原反应性
- RVPFast与实时荧光PCR/RT-PCR检测呼吸道病毒结果的比较被引量：4
- 2014年
- 目的评价xTAG呼吸道病毒群快速检测(Respiratory Virus Panel Fast Array,RVP Fast)技术检测呼吸道病毒的临床应用价值。方法选取经实时荧光定量PCR/RT-PCR筛查的74份呼吸道病毒阳性和4份阴性鼻拭子标本,用RVP Fast和RTPCR同时检测78份标本的8种呼吸道病毒及其亚型(共19型),运用McNemarχ2检验,Kappa检验和线性回归方法对检测结果进行统计处理。结果两种方法检测78份标本有71份结果完全相符,包括55份单个病毒感染标本,12份混合病毒感染标本和4份阴性标本。两种方法检测结果总体比较无统计学差异(P>0.05),一致性较好(Kappa=0.960,P<0.01),RVP Fast荧光强度中位数(MFI)与实时荧光PCR/RT-PCR阈值循环数(Ct)呈负相关(r=-0.529,P<0.01)。结论 RVP Fast芯片技术的检测性能准确可靠,可应用于国内呼吸道病毒感染的快速、高通量检测,具有推广价值。
- 余志武王压娣陈钰静郭勇晖丁细霞余楠车小燕
- 关键词：呼吸道病毒聚合酶链反应FAST
- 建立检测18种(型/亚型)呼吸道病毒的两种循环参数的实时荧光定量PCR被引量：8
- 2014年
- 目的建立两种不同循环参数的实时荧光定量PCR,检测包括流感病毒、冠状病毒等18种（型/亚型）呼吸道病毒。方法引用文献报道的18种（型/亚型）呼吸道病毒引物和探针,建立两种不同循环参数的实时荧光定量PCR法,考核方法的敏感性、特异性和准确性,并用临床标本进行验证。结果成功建立了可检测18种（型/亚型）呼吸道病毒的两种不同循环参数的实时荧光定量PCR法;该法特异性较好,最低检测限为10拷贝数/μL,变异系数（CV）为1.26%~3.43%,重复性良好;408份临床标本中,用该法检测鼻拭子标本阳性率为63.2%（225/356）,肺泡灌洗液标本阳性率为25.0%（13/52）。结论建立的实时荧光定量PCR法简便、特异、敏感、稳定,适用于临床常见呼吸道病毒感染的早期诊断。
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- 关键词：呼吸道病毒实时荧光定量聚合酶链反应特异性敏感性
