- 卵巢癌细胞中乳源免疫调节肽受体蛋白的筛选被引量：1
- 2012年
- 目的乳源免疫调节肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上进行受体蛋白的筛选。方法异硫氰酸荧光素(FITC)标记PGPIPN,作用于SKOV3观察其细胞定位;从SKOV3中提取作用部位的蛋白;通过NHS-activated亲和层析柱进行分离和纯化受体蛋白质,SDS-PAGE的初步鉴定。结果在激光扫描共聚焦显微镜下观察荧光标记肽结合于SKOV3的胞膜上。通过提取膜蛋白和亲和层析法成功筛选了受体膜蛋白。结论 PGPIPN的作用位点位于细胞膜上,其抗癌作用可能通过胞膜结合蛋白而启动信号转导通路,为进一步探讨其抗癌机制奠定基础。
- 何晓光郑欣任明强张文晓杨浩然魏彩顾芳秦宜德
- 关键词：免疫调节肽受体蛋白
- 乳铁蛋白抗菌-免疫调节融合肽的载体构建及在大肠杆菌中的表达和纯化被引量：3
- 2012年
- 目的构建乳铁蛋白抗菌-免疫调节融合肽(LIFP)表达载体,在E.coli BL21中诱导高表达并进行纯化。方法以乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)与乳源免疫调节肽(PGPIPN)的序列为参照,以连接臂(GGGGS)连接两种肽,设计LIFP基因,并在其5'端设计凝血酶FXa识别的酶切位点。将融合肽基因构建到表达载体pGEX-KG中,转化到E.coli BL21中,用IPTG低温诱导表达,通过AKTA层析系统纯化融合蛋白,Western blot进行鉴定。结果成功构建pGEX-KG-LIFP原核表达载体,并诱导其高表达。通过AKTA蛋白纯化系统,用亲和层析方法纯化,得到高纯度的融合蛋白。结论成功构建了LIFP表达载体,制备并纯化了LIFP,为进一步研究该肽功能和药物开发奠定基础。
- 张文晓秦宜德何晓光郑欣任明强
- 关键词：免疫调节肽融合蛋白纯化
- 免疫调节肽对卵巢癌skov3细胞凋亡及相关基因表达的影响被引量：6
- 2012年
- 目的研究免疫调节肽(PGPIPN)对人卵巢癌细胞株skov3凋亡及相关基因表达的影响。方法体外培养卵巢癌skov3细胞,分别使用10-6、10-5、10-4、10-3、10-2g/L的PGPIPN孵育skov3细胞48 h,观察量效关系;通过cDNA芯片技术筛选凋亡相关基因;实时荧光定量PCR法检测Bax、Bcl-xl、Caspase-3 mRNA水平的表达量;Western blot法检测Bax、Bcl-xl、Caspase-3蛋白表达量。结果与对照组相比,Bax和Caspase-3的表达随着PGPIPN浓度升高而升高(P<0.05);Bcl-xl的表达随着PGPIPN浓度升高而降低(P<0.05)。结论 PGPIPN通过促进细胞中Bax及抑制Bcl-xl的表达来调控skov3细胞的凋亡,该过程可能和Caspase的活化相关。
- 郑欣何晓光张文晓杨浩然魏彩顾芳任明强秦宜德
- 关键词：免疫调节肽CDNA芯片BAXBCL-XL
