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林纳: 作品数：21 被引量：53H指数：4; 供职机构：贵州省安顺市人民医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金福建医科大学科学研究发展基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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HBx与Bcl-2家族被引量：2: 2004年; 林纳; 关键词：BCL-2家族核酸内切酶细胞核染色质 DNA降解

乙型肝炎病毒X蛋白与细胞色素C氧化酶Ⅲ特异性结合的研究: 目的乙型肝炎病毒慢性感染是导致肝细胞癌的主要危险因子,X 基因结构的特殊性和高度保守性,提示其在 HBV 生物学上具有重要的功能意义。目前已证实 X 蛋白不直接作用于双链 DNA,而主要通过和细胞内多种蛋白质相互作用来影...; 李丹林纳陈治新陈丰霖王小众; 文献传递

表皮生长因子受体和整合素通路交叉作用对胃癌细胞侵袭的影响被引量：6: 2012年; 目的了解表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和整合素信号通路在胃癌细胞SGC7901中的交叉反应和对细胞侵袭增殖的影响。方法使用EGF和Fn刺激SGC7901细胞,免疫沉淀和蛋白质电泳检测ERK、FAK和p130cas总蛋白和FAK Y397、p130cas Y410和ERK总酪氨酸磷酸化的改变;使用改良Boyden小室法检测胃癌细胞侵袭力;MTT法检测细胞增殖的改变;使用RNA干扰降低FAK表达,观察FAK低表达对交叉反应和胃癌侵袭增殖的影响。结果 ERK、FAK和p130cas总蛋白在刺激前后无变化(P>0.05)。Fn刺激后,ERK总酪氨酸磷酸化增强了2.90倍(P<0.05),细胞侵袭力增强了2.36倍(P<0.05),24 h MTT值升高了1.68倍(P<0.05);EGF刺激后,FAKY397磷酸化增强了2.75倍(P<0.05),p130cas Y410磷酸化增强了4.33倍(P<0.05),细胞侵袭力增强了1.50倍(P<0.05),24 h MTT值分别升高了1.76倍(P<0.05)。转染FAK siRNA组细胞,FAK Y397磷酸化表达只有对照组的0.30倍(P<0.05);Fn刺激后,ERK总磷酸化表达只有对照组的0.66倍(P<0.05),细胞侵袭力只有对照组的0.37倍(P<0.05),24 h MTT值只有对照组的0.63倍(P<0.05);EGF刺激后,p130 Y410磷酸化只有对照组的0.49倍(P<0.05),细胞侵袭力只有对照组的0.48倍(P<0.05),24 h MTT值只有对照组0.77倍(P<0.05)。结论 EGFR和整合素信号在胃癌细胞中发生交叉反应,FAK是其中的关键信号分子,阻断FAK表达可以有效抑制两条信号通路引起的胃癌细胞侵袭和增殖。; 丁健李丹林纳王小众王承党吴婷; 关键词：胃癌表皮生长因子受体整合素

HBV X基因对成人肝细胞HL-7702线粒体功能的影响被引量：4: 2008年; 目的:研究HBV X基因与线粒体COXⅢ基因相互作用以及对线粒体功能的影响。方法:将HBV X基因真核表达载体pCDNA3-X及空载体pCDNA3转染成人肝细胞HL-7702细胞,经过2周G418筛选,获得稳定表达的新细胞株,分别命名为HL-7702/HBx和H-7702/pcDNA3,RT-PCR和Western blot方法证实HBV X基因在HL-7702/HBx细胞内的稳定表达。抽提细胞总RNA进行半定量RT-PCR及分离细胞线粒体进行Western blot检测COXⅢ表达水平变化,并通过酶动力学方法检测线粒体细胞色素氧化酶活性。结果:重组质粒pcDNA3-X转染后经G418筛选,RT-PCR和Western blot分析结果显示HL-7702-HBx细胞能够稳定表达HBV X基因。RT-PCR和Western blot结果发现HBV X基因下调COXⅢ蛋白表达而不影响mRNA水平表达。酶动力学检测发现线粒体细胞色素C氧化酶活性降低。结论:HBV X基因通过转录后水平调节COXⅢ表达,HBx通过与COXⅢ相互作用抑制线粒体细胞色素氧化酶活性。; 林纳李丹陈红英陈治新王小众; 关键词：HBX COX

HBV X基因转染对HepG2肝癌细胞凋亡的影响及其机制被引量：3: 2005年; 目的 :研究HBVX基因转染对HepG2肝癌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响。方法 :用脂质体转染法将HBx真核表达载体pcDNA3 /HBx瞬时转入HepG2细胞 ,以未转染的HepG2细胞及转染空载体 pcDNA3 的细胞为对照。RT PCR法检测HBx基因的表达 ;MTT法检测各组细胞的增殖活性 ;TUNEL法检测各组的凋亡情况。β actin为内参 ,半定量RT PCR法检测凋亡相关基因Bax、Bcl xL、c myc的表达量变化。结果 :pcDNA3 X转染HepG2细胞后 ,RT PCR扩增出HBVX片段 ,空质粒组及正常对照组均未扩增出相应片段。HepG2细胞转染HBx基因后 ,相对于对照组细胞增殖能力明显下降 ,凋亡增多 ,差异有显著性意义 (P <0. 0 1) ;转染HBx的细胞Bax、Bcl xL、c mycmRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染质粒组明显增高 ,差异有显著性意义 (P <0 . 0 5 )。结论 :成功将HBx基因转染入HepG2细胞 ,并在细胞中表达 ,转染HBx基因可同时上调Bax、Bcl xL、c mycmRNA表达 ,促进HepG2细胞凋亡 ,抑制增殖。; 林纳陈红英张生君李丹陈治新王小众; 关键词：HBX基因 BCL-XL 肝癌细胞凋亡 PCDNA3 脂质体转染法

乙型肝炎病毒PreS1蛋白与初期多肽相关复合体α亚单位特异性结合的研究被引量：1: 2009年; 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)PreS1蛋白与人类初期多肽相关复合体α亚单位(nascent-polypeptide-asso-ciated complex alpha polypeptide,NACA)之间的结合作用。方法采用交合实验验证PreS1蛋白和NACA在酵母细胞内的结合作用,利用离体结合实验证实二者在体外的结合作用,免疫共沉淀实验证实二者在哺乳动物细胞中的特异性结合。结果携带NACA基因的酵母同携带preS1基因的酵母交合后发生反应,LacZ活性检测菌落呈现蓝色,离体结合实验Western印迹中出现特异性结合活性反应条带,提示PreS1蛋白和NACA在体外存在直接相互作用,免疫共沉淀实验在13×103处出现蛋白条带,提示在哺乳动物细胞水平仍能检测到PreS1蛋白和NACA的特异结合。结论NACA与PreS1蛋白在酵母细胞和哺乳动物细胞中均存在特异性结合,推测NACA可能通过与PreS1蛋白的结合影响病毒黏附及反式激活等过程。; 李丹丁健林纳王小众; 关键词：肝炎病毒乙型 PRES1蛋白

乙肝病毒X基因慢病毒载体的构建和鉴定被引量：2: 2011年; 目的构建乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白的重组慢病毒载体pRRLsincPPT-hPGK-X-IRES-eGFP-WPRE(pRRL-X),并感染正常组织来源的人肝细胞HL-7702,以验证其在体外的感染效率。方法采用PCR技术扩增出HBV X基因的DNA片段,用IN-Fusion技术构建表达载体pRRL-X并鉴定,jet-PEI转染试剂与三质粒共转染293T细胞后浓缩、计算慢病毒颗粒的滴度;用慢病毒液感染正常组织来源的人肝细胞HL-7702,120 h后初步观察慢病毒颗粒的感染情况。Real-time PCR和Western blot法检测细胞HBV X基因的表达。结果成功构建HBV X基因的慢病毒表达载体质粒pRRL-X。经293T细胞包装后,用慢病毒感染正常组织来源的人肝细胞HL-7702,120 h后被感染的细胞内可见强弱不等的荧光。结论成功构建HBV X慢病毒表达载体。; 陈豪李丹林纳黄月红陈志新王小众; 关键词：质粒慢病毒感染慢病毒属聚合酶链反应

乙型肝炎病毒X蛋白与细胞色素C氧化酶亚单位Ⅲ结合的定位研究被引量：1: 2014年; 目的探索细胞色素C氧化酶亚单位Ⅲ（COXⅢ）与乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）的具体结合位点。方法构建pAS2-1-X变异体重组载体，醋酸锂转化法将其转入酵母细胞，通过PCR法及测序法证实目的片段转入酵母细胞；Westem blot法明确变异体蛋白在酵母细胞中能否正确表达，滤膜转印法排除自身激活作用；固体培养基交合实验及β-半乳糖苷酶活性实验检测HBx和COXⅢ的结合区域。结果成功构建含HBx第1～72位氨基酸的变异体重组载体pAS2-1-Xl和第1～117位氨基酸的变异体重组载体pAS2-1-X2，测序及PCR均证实片段的正确性。Western blot证实变异体蛋白在酵母细胞中可正确表达，且变异体蛋白无自身激活作用。交合实验及β-半乳糖苷酶活性检测将HBx和COXⅢ的结合区域定位于72～117位氨基酸。结论通过酵母双杂合实验证实HBx和COXⅢ的结合区域定位于72～117位氨基酸，此结合区域的明确有望帮助进一步阐明X蛋白在体内的作用机制，并可能为慢性乙型肝炎、肝硬化及肝癌的防治提供新思路。; 李丹陈治新陈芸林纳王小众; 关键词：肝炎病毒乙型 X蛋白结合位点

HBV X基因和X蛋白的功能被引量：11: 2006年; HBVX基因编码的X蛋白(PX)是一种多功能蛋白,在HBV感染和肝细胞癌(HCC)发展的不同阶段,执行不同的生物学功能.PX参与调节病毒复制,显著影响肝细胞信号传导、新陈代谢、凋亡、细胞因子产生、细胞周期调控和癌基因、抑癌基因等方面基因表达,干扰线粒体氧化磷酸化等能量代谢过程,造成细胞氧化损伤,促进细胞凋亡.; 王小众林纳; 关键词：X蛋白反式激活

靶向乙型肝炎病毒X蛋白小干扰RNA对稳定表达X基因的正常人肝细胞株线粒体功能的影响: 2009年; 目的构建并鉴定靶向HBVX蛋白（HBx）小干扰RNA（siRNA）重组表达质粒，观察其对稳定表达HBx基因的正常人肝细胞株HL-7702／HBx线粒体功能的影响。方法设计合成两条针对全长HBx基因具有短发夹结构的siRNA序列，克隆至载体psiRNA—Hh1GFPzeo中，构建重组表达质粒pX1和pX2，并以不针对任何序列的重组质粒pScr作为对照。通过脂质体介导转染入HL-7702／HBx肝细胞株，RT—PCR及Western印迹检测其对HBx的阻抑效应。流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体膜电位（Δψm）水平的变化。采用方差分析对实验结果进行统计分析。结果酶切鉴定和测序结果证实pX1和pX2构建成功。pScr、pX1、pX2分别转染入HL-7702／HBx细胞48h后，空白对照组HBxmRNA和蛋白表达水平分别为0．65±0．12和0．62±0．09，pX1组分别为0．33±0．10和0．19±0．08，明显低于空白对照组（t=4．73，P〈0．05；t=7．53，P〈0．05），pX2组分别为0．48±0．10和0．37±0．11，亦明显低于空白对照组（t=2．39，P〈0．05；t=4．43，P〈0．05），但pXl组抑制效果强于pX2组（t=2．28，P〈0．05）。RNA干扰后细胞内ROS水平为5．00±0．38，Aqrm水平为33．864-0．50；空白对照组ROS为72．10±0．55，AWm为3．57±0．26（t=276．22，P〈0．05；t=107．15，P〈0．05）。结论靶向HBx的siRNA能特异性抑制HBx在HL-7702／HBx细胞中的表达，并降低细胞内ROS水平，提高AWm水平，减轻细胞内氧化应激反应。; 黄嵘峰林纳陈红英陈治新王小众; 关键词：病毒蛋白质类膜电位

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