郑小芳
- 作品数：9 被引量：4H指数：2
- 供职机构：首都医科大学附属北京朝阳医院更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项首都卫生发展科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 自身免疫性疾病患者PD-L1自身抗体的筛查
- 2017年
- 目的调查自身免疫性疾病和结核病患者PD—L1自身抗体产生情况。方法以重组人PD-L1蛋白为抗原，间接ELISA和免疫印迹法对血清样本进行测定，包括63例类风湿性关节炎（RA）、38例系统性红斑狼疮（SLE）、42例强直性脊柱炎（AS）、28例干燥综合征（ss）、50例结核病（TB）和60例健康人对照。结果ELISA结果显示，与健康人对照组（0．1317±0．0284，N=20）相比，RA（0．1996±0．0579，P〈0．0001）、SLE（0．1689±0．0338，P=0．0005）和AS组（0．1729±0．0619，P=0．0107）PD-LI自身抗体水平显著增高，而SS组（0．1341±0．0397，P=0．6834）无显著性差异。与健康人对照组（0．1541±0．0139，N=40）相比，结核病组（0．1709±0．1069，P=0．4215）PD—L1自身抗体水平无显著差异，但存在ELISA检测阳性个体，经免疫印迹证实存在PD—L1自身抗体。在46％RA、26％SLE、29％AS、1l％SS和12％TB中可检出PD-L1自身抗体，而健康人对照组未检出。结论自身免疫性疾病可检测到PD-L1自身抗体，此为进一步研究PD-L1与免疫相关疾病和免疫检查点调控机理奠定了基础。
- 闫卓红王小珏郑小芳易玲韦攀健贾红艳杨斌张洪涛
- 关键词：PD-L1自身抗体自身免疫性疾病免疫印迹
- 卡介苗缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨卡介苗（BCG）缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用。方法选取主流结核病血清学检测抗原的4种不同组合试剂A（结核分枝杆菌抗体IgG检测试剂）、B（结核分枝杆菌抗体检测试剂）、C（结核杆菌特异性抗体检测试剂）、D（活动性结核抗体检测ELISA系统），通过免疫印迹、胶体金和酶联免疫吸附等免疫学方法检测109例活动性结核患者和97名健康人群[分为结核菌素纯蛋白衍生物试验（PPD）阳性和阴性组]的结核抗体，应用贝叶斯概率统计学方法，综合分析不同抗原组合对结核病检测准确率的影响。结果试剂A、B、C、D对活动性结核病IgG检出率分别是80．0％、66．7％、80．7％、56．0％，明显高于健康人群的23．9％、8．9％、6．6％、1．0％，差异均有统计学意义（X2值分别为47．53，51．59，90．48，69．68，均P〈0．01）。其中试剂A、B对健康人群结核抗体检出率随PPD阳性反应强度而增高（X2值分别为2．124，2．220，均P〈0．05），试剂C、D对健康人群结核抗体检出率与PPD反应强度无相关性（X2值分别为0．122，0．479，均P〉0．05），试剂D的准确率最高，其对活动性肺结核患者IgM检出率为2．1％。结论IgG检出的敏感性与抗原的选择及组合数量呈正相关，高的检测敏感性常伴随特异性的损失，选择BCG缺失抗原可显著提高检测特异性。
- 郑小芳易玲韦攀健贾红彦李惠文赵雁林张洪涛
- 关键词：结核抗原卡介苗血清学诊断
- 天然调节T细胞与结核病免疫病理关联被引量：2
- 2010年
- 目的 检测调节性T细胞（Tr）在结核病病人是否增高,确证Tr与结核免疫病理的关联性,为Tr功能研究提供疾病模型.方法 流式细胞术（FACS）分选CD3＋CD4＋T及CD3＋CD8＋T等主要淋巴细胞亚群,通过RT-PCR测定Foxp3基因在正常和结核病病人T细胞亚群中的表达,FACS多色分析Foxp3 T细胞在CD4＋CD25＋细胞群体中的分布,累积病例分析Tr细胞在外周血扩增情况,免疫组化方法分析Tr在结核病理的浸润,结合临床资料分析Tr数量的改变与结核病的关联性.结果 Foxp3基因在正常和结核病病人CD3＋ CD4＋T细胞中特异性扩增,FACS分析表明foxp3主要表达于CD4＋ CD25high亚群中,占CD4＋ CD25highT细胞的80%以上,以CD4＋CD2high Foxp3＋三联标志检测40例正常与51例活动性结核病病人外周血Tr占CD4＋T细胞比例分别为（0.23±0.20）%和（1.01±1.00）%,结核病病人较正常人高4.4倍,Tr在结核病明显扩增（P〈0.01）,结核病理组织中有高频率Foxp3＋细胞浸润.Tr扩增与结核病有效治疗和预后的关联性有深入探讨价值.结论 Tr细胞在结核病病人增高,并与结核免疫病理损伤相关,结核病可作为Tr细胞功能研究的疾病模型.
- 赵雁林王敬张海青易玲李惠文韦攀健赵丹王小珏郑小芳张洪涛
- 关键词：天然调节性T细胞结核病免疫病理
- 脑源性神经营养因子(rBDNF)转基因小鼠载体的构建和体外表达
- 2009年
- 目的构建大鼠脑源性神经营养因子(rBDNF)的条件性转基因小鼠载体,鉴定其在体外细胞系中的表达。方法用PCR方法扩增rBDNF片断,插入pNAO载体(lox-Stop-lox-IRES-EGFP),构建成rBDNF条件性基因载体(lox-Stop-lox-rBDNF-IRES-EGFP),使用Fugene 6转染试剂,将其同Cre重组酶表达质粒pGK-Cre共同导入HEK-293细胞系中,通过荧光显微镜观察、PCR及ELISA方法确定Cre-lox同源重组。结果经酶切和测序鉴定,rBDNF条件性基因载体构建成功。共转染后的HEK-293细胞中,观察到绿色荧光蛋白(EGFP)的强荧光表达;细胞基因组DNA中检测到Cre-lox基因重组;对rBDNF定量检测的ELISA结果显示,细胞内有大量的rBDNF释放到细胞外。结论rBDNF条件性基因载体构建成功,在体外细胞系中,检测到rBDNF及EGFP强表达,为转基因显微注射打下基础。
- 郑小芳那波宏之张洪涛
- 关键词：大鼠脑源性神经营养因子
- 自身免疫性疾病患者PD-L1自身抗体的筛查
- 2016年
- 免疫检查点主要指免疫系统中存在的抑制性免疫调节信号,生理情况下一方面参与维持对自身抗原的免疫耐受,避免自身免疫性疾病,另一方面通过调节外周组织中免疫应答的持续性和强度避免组织损伤。细胞毒性T淋巴细胞抗原-4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4, CTLA-4）、程序性死亡受体-1（programmed death-1,PD1）及其配体 PD-L1（programmed cell death-ligand 1）是目前免疫检查点研究的热点分子,被认为是免疫调节的主要信号通路。自身抗体是免疫病理调节潜在的调控方式,国外研究主要聚焦于类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）,早期文献报道可以检测到CTLA-4自身抗体,近期报道了 RA患者中检出 PD-L1自身抗体。目前国内尚未见相关研究,在其他免疫关联性自身免疫疾病国内外均少有涉及,本研究筛查了多种自身免疫关联性疾病,以及免疫病理为基础的结核病患者PD-L1自身抗体存在状况,明确免疫检查点分子自身抗体调控方式的存在,为研究自身免疫病及免疫关联疾病发病机理、寻求新的治疗策略提供基础研究依据。
- 闫卓红王小珏郑小芳易玲韦攀健贾红艳杨斌张洪涛
- 关键词：自身免疫性疾病PD-L1自身抗体淋巴细胞抗原
- 卡介苗缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用
- 2012年
- 目的探讨卡介苗（BCG）缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用。方法选取主流结核病血清学检测抗原的四种不同组合试剂A（结核分枝杆菌抗体IgG检测试剂）、B（结核分枝杆菌抗体检测试剂）、C（结核杆菌TB特异性抗体检测试剂）、D（活动性结核抗体检测ELISA系统），通过免疫印迹、胶体金和酶联免疫吸附等免疫学方法检测109例活动性结核患者和97名健康人群（分为结核菌素纯蛋白衍生物PPD阳性和阴性组）的结核抗体，应用贝叶斯概率统计学方法，综合分析不同抗原组合对结核病检测准确率的影响。结果试剂A、B、C、D对活动性结核病IgG检出率分别是80．0％、66．7％、80．7％、56．0％，明显高于健康人群的23．9％、8．9％、6．6％、1．0％，差异均有统计学意义（χ^2值分别为47．53，51．59，90.48，69．68，均P〈0．01）。其中A、B试剂对健康人群结核抗体检出率随PPD阳性反应强度而增高（χ^2值分别为2．124，2．220，均P〈0．05），C、D试剂对健康人群结核抗体检出率与PPD反应强度无相关性（χ^2值分别为0．122，0．479，均P〉0．05），试剂D的准确率最高，其对活动性肺结核患者IgM检出率为2．1％。结论IgG检出的敏感性与抗原的选择及组合数量呈正相关，高的检测敏感性常伴随特异性的损失，选择BCG缺失抗原可显著提高检测特异性。
- 郑小芳易玲韦攀健贾红彦李惠文赵雁林张洪涛
- 关键词：结核抗原卡介苗血清学诊断
- Using CD137 to identify specific CD4+ T cell responses to Mycobacterium tuberculosis
- To evaluate the ability of CD137 to identify Mycobacterium tuberculosis (Mtb)-specific CD4+ T cells in the per...
- 闫卓红郑小芳易玲王小珏韦攀健王敬周丽君赵雁林张洪涛
- SPLUNC1-Ig融合蛋白在CHO细胞中的稳定表达及活性初步分析
- 2010年
- 目的 构建短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1（SPLUNC1）-Ig融合蛋白表达体系并初步分析其活性.方法 在质粒PGEM-T easy-SPLUNC1基础上联合应用大引物法和巢式PCR实现目的序列147位碱基的定点突变,亚克隆于表达载体PDH3,构建PDH3-SPLUNC1的表达质粒.稳定转染CHO/dhfr-细胞完成SPLUNC1-Ig融合蛋白的表达,并在氨甲喋呤（MTX）加压下筛选出稳定表达的细胞株,应用ELISA检测蛋白表达的水平.利用蛋白A亲和层析系统纯化获得的SPLUNC1-Ig融合蛋白,并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western免疫印迹进行鉴定,经ELISA、Western免疫印迹分析SPLUNC1-Ig融合蛋白的特异性和活性.结果 经酶切及测序结果证实预定位点已突变,琼脂糖凝胶电泳出现大小为768 bp的目的条带;测序发现SPLUNC1基因的147位碱基A均已突变成C,证实PDH3-SPLUNC1表达质粒构建成功.RT-PCR扩增出768 bp大小的SPLUNC1基因.ELISA检测CHO/dhfr-细胞上清表明SPLUNC1-Ig融合蛋白在3个月内稳定表达,水平与时间的延长无关.经亲和层析获得SPLUNC1-Ig融合蛋白,SDS-PAGE电泳可见相对分子质量约52 500大小的条带.Western免疫印迹也在45 000与66 200之间出现与预测位置相符的特异目的条带.SPLUNC1-Ig融合蛋白浓度为0.39 mg/L时与脂多糖结合活性明显高于阴性对照,6.25 mg/L时与脂多糖结合的A450值基本达到平台期.Western免疫印迹也显示未变性的脂多糖可与SPLUNC1-Ig融合蛋白结合,而变性后却不能与之结合.结论 建立了非切胶纯化的定点突变方法,顺利实现了表达质粒的构建.成功构建SPLUNC1-Ig融合蛋白表达体系,其分泌的目的蛋白具有蛋白的天然结构和体外活性.
- 薛君力赵雁林易玲王小珏李惠文韦攀健郑小芳张洪涛
- 关键词：CHO细胞脂多糖类免疫活性
- 天然调节T细胞与结核病免疫病理关联
- 2010年
- 目的检测调节性T细胞（Tr）在结核病病人是否增高，确证Tr与结核免疫病理的关联性，为Tr功能研究提供疾病模型。方法流式细胞术（FACS）分选CD3＋CD4＋T及CD3＋CD8＋T等主要淋巴细胞亚群，通过RT—PCR测定Foxp3基因在正常和结核病病人T细胞亚群中的表达，FACS多色分析Foxp3T细胞在CD4＋CD25＋细胞群体中的分布，累积病例分析Tr细胞在外周血扩增情况，免疫组化方法分析Tr在结核病理的浸润，结合临床资料分析Tr数量的改变与结核病的关联性。结果Foxp3基因在正常和结核病病人CD3＋CD4＋T细胞中特异性扩增，FACS分析表明Foxp3F要表达于CD4＋CD25＋。“亚群中，占CD4＋CD25highT细胞的80％以上，以CD4＋CD25highFoxp3＋三联标志检测40例正常与51例活动性结核病病人外周血Tr占CD4＋T细胞比例分别为（0．23±0．20）％和（1．01±1．00）％，结核病病人较正常人高4．4倍，Tr在结核病明显扩增（P〈0．01），结核病理组织中有高频率Foxp3＋细胞浸润。Tr扩增与结核病有效治疗和预后的关联性有深入探讨价值。结论Tr细胞在结核病病人增高，并与结核免疫病理损伤相关，结核病可作为Tr细胞功能研究的疾病模型。
- 赵雁林王敬张海青易玲李惠文韦攀健赵丹王小珏郑小芳张洪涛
- 关键词：天然调节性T细胞结核病免疫病理
