梅雪芳
- 作品数：11 被引量：8H指数：2
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：上海出入境检验检疫局科研基金国家质检总局科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 大片形吸虫排泄分泌产物对体外培养LO2人肝细胞的影响
- 2018年
- 目的初步探讨大片形吸虫排泄分泌产物(FgESP)对体外培养LO2人肝细胞的增殖及对肝细胞损伤相关的生化指标的影响。方法将LO2人肝细胞分为5个密度组(1 000、 3 000、 5 000、 7 000、 10 000个/孔),铺于96孔板中,空白对照组只加入培养基,根据LO2细胞生长曲线选择最适细胞铺板密度。在96孔板中,以最适细胞密度铺板,分为0.02、 0.10、 0.20、 0.40、 1.00 mg/ml FgESP等5组,每组设4个重复,以PBS作为阴性对照组,在培养箱中孵育4、 8、 12、 24、 48和72 h后进行MTT细胞活性检测,测吸光度(A_(490)值)。在24孔板中,分为0.02、 0.10、 0.20、 0.40、 1.00 mg/ml FgESP等5组,每组设3个重复,以PBS作为阴性对照组,分别在培养4、 8、 12、 24、 48和72 h后,收集LO2细胞上清,测定碱性磷酸酶(ALP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)的含量。采用GraphPad Prism 6.0软件进行统计学分析。结果根据LO2人肝细胞生长曲线,筛选出5 000个/孔为96孔板最佳铺板密度。FgESP作用72 h后, MTT细胞活性检测结果显示, 0.02、 0.10、 0.20、 0.40、 1.00 mg/ml FgESP等5组的A_(490)值分别为1.29±0.01、 1.28±0.06、1.13±0.08、 0.97±0.06、 0.25±0.01,均低于对照组(1.45±0.05)(P <0.01)。生化指标检测结果显示, 0.40、1.00 mg/ml FgESP作用细胞LO2人肝72 h后, ALT含量分别为2.00±0.00、 3.67±0.58, AST含量分别为5.33±0.58、7.67±0.58,均高于对照组的(P <0.01);作用48 h后, 1.00 mg/ml FgESP组ALT、 AST含量分别为2.00±0.00、7.00±0.00,高于对照组的0.33±0.58、 3.67±0.58 (P <0.01);在12～72 h内, 0.10、 0.20、 0.40、 1.00 mg/ml FgESP作用后ALP含量升高(P <0.01),而0.02 mg/ml FgESP仅在作用72 h后ALP含量升高(P <0.01);各实验组ALB含量与阴性对照组差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 FgESP体外作用可抑制LO2人肝细胞增殖能力,且细胞增殖的抑制及损伤程度与FgESP的浓度相关。
- 赵文苹梅雪芳施维朱彬侯林静黄维义
- 关键词：大片形吸虫MTT法细胞损伤
- 大片形吸虫CatL1蛋白的原核表达及其特异性多克隆抗体的制备被引量：1
- 2020年
- 为了制备大片形吸虫诊断抗体,试验采用原核表达制备大片形吸虫组织蛋白酶L1重组蛋白(rFgCatL1),用该蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗体效价,Western-blot法检测多克隆抗体的特异性。结果表明:CatL1基因大小为981 bp,蛋白质分子质量为39.0 ku左右,与预期分子质量大小一致。制备的小鼠多克隆抗体血清效价达1∶128 000,能特异性识别大片形吸虫排泄-分泌物(ESP)抗原。说明制备的rFgCatL1多克隆抗体可作为良好的诊断抗体用于研制快速诊断试剂盒。
- 王乐铭侯林静饶国顺梅雪芳施维王渝瑞吴正姣王冬英张为宇
- 关键词：大片形吸虫原核表达多克隆抗体特异性
- 横川后殖吸虫与扇棘单睾吸虫双重PCR鉴别方法的建立被引量：1
- 2015年
- 目的建立一种能快速鉴定横川后殖吸虫(Metagonimus yokogawai)和扇棘单睾吸虫(Haplorchis taichui)的双重PCR方法。方法从Gen Bank中获取横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫以及与其同源性较高的虫种的核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列,应用Primer premier 5.0软件设计2对特异性引物,并优化PCR反应体系和反应条件,建立双重PCR法。将横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫与17个相关虫种一起进行PCR扩增,检测方法的特异性。横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫的ITS1扩增产物经p MD19-T载体进行TA克隆获得质粒,并将质粒进行梯度稀释,检测其敏感性。应用新建的双重PCR法鉴定从47副猫内脏和40副犬内脏中收集的吸虫,检测该方法的准确性和实用性。结果新建的双重PCR法能扩增出横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫的目的片段,大小分别为648 bp和279 bp,不与钩棘单睾吸虫、华支睾吸虫、心形咽口吸虫、次睾属吸虫囊蚴、外睾属吸虫囊蚴、藐小棘隙吸虫、抱茎棘隙吸虫、弗氏棘口吸虫、似锥低颈吸虫、全冠属吸虫、重盘属吸虫、异尖属线虫、东方次睾吸虫、卫氏并殖吸虫、瓦氏瓦生吸虫、背孔属吸虫和宫脂属线虫的DNA发生交叉扩增,具有较好的特异性。敏感性试验表明,应用该双重PCR法,2类吸虫DNA的最低检测值分别为1.49×10-1pg和1.14×10-1pg。对来自猫内脏和犬内脏的吸虫检测表明,该方法能够区分横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫,并且不与猫、狗中其他的吸虫DNA发生交叉扩增。结论本研究所建立的双重PCR法可用于快速鉴定横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫。
- 梅雪芳李树清康羊群石云良黄腾飞陈志飞黄维义
- 关键词：双重PCR
- 大片吸虫分泌排泄抗原对小鼠肝损伤的研究被引量：3
- 2016年
- 为探究大片形吸虫分泌排泄物对小鼠肝脏的影响，将60只雌性昆明小鼠随机分为试验组和对照组各30只。每隔2天注射0．4mgFgESP200μL，对照组注射PBS200μL。于首次注射后第10天、4周、7周、14周、18周处死6只小鼠，观察肝脏表观病理变化，制做肝脏HE染色病理切片并测定血清中与肝功能密切相关的ALT、AST、ALP、ALB、GLB等生化指标的变化。肝脏眼观病理变化结果显示，试验组从第4周可见白色点状结节，症状随着时间的延长而加重；肝脏组织病理结果显示，从第2周开始小鼠肝脏出现空泡变性，至第18周出现大量炎性细胞浸润，并伴随轻度肝纤维化；生化指标动态变化结果显示，ALT、AST活性在整个试验进程中出现显著上升（P〈0．05），ALP活性在第4周～7周明显升高，之后降低（P〉0．05），ALB和GLB水平在整个试验进程中分别表现为显著下降和显著上升（P〈0．05），提示肝细胞可能发生变性、坏死导致血清中转氨酶活性升高，蛋白合成能力下降。本研究结果表明大片吸虫分泌排泄抗原（FgESP）可导致小鼠肝损伤，损伤程度随着FgESP的持续注射而加重。
- 梅雪芳施维张瑶瑶黄维义
- 关键词：大片形吸虫肝脏损伤小鼠
- 横川后殖吸虫与扇棘单睾吸虫二重PCR鉴别方法的建立
- 目的 建立一种能快速鉴定横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫的二重PCR方法.方法 从GenBank中获取横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫以及与其同源性较高的虫种的ITS1序列,应用Primer premier 5.0软件设计两对特异性...
- 梅雪芳李树清康羊群石云良黄腾飞陈志飞黄维义
- 关键词：二重PCR
- 大片形吸虫感染致小鼠肝损伤的动态变化
- <正>为探讨非适宜宿主中大片形吸虫感染引起的肝脏病理改变和血清学变化的相互关系,本研究将72只4~5周龄SPF级雌性昆明小鼠随机分为2组:对照组24只,感染组48只,感染组每只小鼠感染大片形吸虫囊蚴15个。于感染后1、3...
- 梅雪芳全琛宇盛兆安施维王冬英黄维义
- 文献传递
- 大片形吸虫分泌排泄产物基于甲基化/羟甲基化调控干扰水牛树突状细胞成熟与功能
- 研究背景：蠕虫在宿主体内迁移和发育过程中会通过持续释放分泌排泄产物（excretory-secretoryproduct,ESP）来影响宿主的免疫微环境，降低甚至沉默宿主的免疫反应，从而实现免疫逃避。许多蠕虫ESP已被证...
- 梅雪芳
- 关键词：大片形吸虫甲基化羟甲基化水牛
- 扇棘单睾吸虫Real-time PCR与常规PCR检测方法的建立
- 2015年
- 根据扇棘单睾吸虫核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列,应用Primer premier 5.0软件自行设计一对可同时应用于real-time PCR和常规PCR的特异引物,建立real-time PCR与常规PCR鉴定扇棘单睾吸虫的方法,评估其特异性及灵敏性。应用建立的方法鉴定犬猫内脏中收集的吸虫,并用测序进行验证,检验方法的准确性和实用性。结果表明,建立的两种方法均只能特异性扩增扇棘单睾吸虫目的片段,不与横川后殖吸虫、钩棘单睾吸虫、华支睾吸虫、瓦氏瓦特松吸虫、棘口属吸虫、背孔属吸虫、心形咽口吸虫、野牛平腹盘吸虫、东方次睾吸虫、卫氏并殖吸虫、异尖属线虫、宫脂属线虫发生交叉扩增;敏感性试验表明,real-time PCR和常规PCR检测扇棘单睾吸虫质粒的最低检测限分别为43拷贝和86拷贝。建立的realtime PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(R2=0.998)。鉴定来自犬猫的吸虫17条,结果显示两种方法均能准确鉴定出扇棘单睾吸虫。
- 李树清梅雪芳林颖峥石云良黄腾飞王巧全张强陈志飞宋青唐智芳黄维义
- 关键词：实时荧光定量PCR常规PCR
- 黑山羊源野牛平腹盘吸虫ITS2基因序列测定及分析被引量：1
- 2016年
- 对首次分离自黑山羊的野牛平腹盘吸虫(Homalogaster paloniae)进行初步的形态学观察,扩增其核糖体内第二间隔转录区基因序列(the second internal transcribed spacer,ITS2)并测序,获得的序列经DNAStar软件处理和人工校对后,得到其精确的ITS2基因序列,长度为295 bp,上传至Gen Bank后获得的登录号为KJ561151。测序结果经对比分析后显示与分离自印度的野牛平腹盘吸虫(GU133056)ITS2基因片段序列一致性为100%。与分离自日本的野牛平腹盘吸虫(AB042190)ITS2基因序列一致性为99%,仅在第69个位点出现差异。
- 梅雪芳杨磊陶立李健黄维义王冬英
- 关键词：黑山羊ITS2
- 钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫ITS2序列测定及其种系发育分析被引量：2
- 2015年
- 本试验将从犬猫肠道中分离的钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫用盐酸卡红染色后观察其形态学特征;PCR扩增其ITS2基因序列并测序,并将测序结果与GenBank同属异形科的多棘单睾吸虫和横川后殖吸虫序列进行比对;应用Mega 6.05软件采用邻位相连法构建种系发育树进行分析。盐酸卡红染色后显示,钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫各形态学特征符合经典的分类学描述。PCR测序后获得钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫ITS2序列长度分别为295和297bp,G＋C含量分别为49.5%（146/295）和54.2%（161/297）。提交至GenBank后获得登录号分别为钩棘单睾吸虫KJ137221-KJ137223,KP165437-KP165439;扇棘单睾吸虫KP165440。序列比对结果显示,钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫种内差异性为0,4种异形吸虫种间差异为15.2%-28.9%。基于ITS2序列建立的种系发育树显示钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫构成自展值为78%的拓扑分支。
- 梅雪芳李树清胡长红黄腾飞陈志飞黄维义
