李巍
- 作品数：52 被引量：82H指数：5
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生文化科学生物学更多>>
- 十二指肠贾第虫γ贾第素基因的原核表达及其表达产物的亚细胞定位
- 2019年
- 为了对十二指肠贾第虫(简称贾第虫)γ贾第素(γ-giardin)进行原核表达及亚细胞定位,研究其生物学功能,提取贾第虫总RNA,反转录成cDNA,经PCR获得γ-giardin基因片段,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a-γ-giardin,再转化入大肠杆菌Rosseta(DE3)后,用IPTG诱导表达,表达蛋白经SDS-PAGE验证,并用切胶纯化法纯化。针对重组蛋白制备了多克隆抗体,并用ELISA测定其效价,Western-blot分析其免疫原性,并利用免疫荧光定位技术对γ-giardin进行定位。结果表明,成功构建了原核表达质粒pET-28a-γ-giardin。表达的重组蛋白的分子质量约为38 ku,且以包涵体形式存在,纯化后的重组蛋白的纯度高达90%以上。ELISA和Western-blot结果显示,γ-giardin抗体具有良好的抗原特异性与优异的抗原结合活性。免疫荧光定位结果表明γ-giardin主要位于贾第虫滋养体的腹吸盘。本研究为今后探讨贾第虫致病机制、临床诊断和治疗奠定了理论基础。
- 石东东张斯雯朱伟宁范琳琳杨萱桐李巍
- 关键词：原核表达亚细胞定位
- 十二指肠贾第虫γ贾第素和δ贾第素基因疫苗的构建及其免疫保护力的评价
- 2019年
- 为了评估贾第虫γ贾第素(γ-giardin)和δ贾第素(δ-giardin)的免疫原性及免疫保护力,构建了截短型真核表达质粒pcDNA3.1-γ-giardin、pcDNA3.1-δ-giardin和pcDNA3.1-γ-δ-giardin,并将这3种质粒肌肉注射到BALB/c小鼠体内,通过血清抗体测定、脾淋巴细胞增殖试验、淋巴细胞检测、细胞因子测定和攻虫试验评价疫苗的免疫保护力。结果显示,接种了这3种真核表达质粒的小鼠产生了特异性的体液和细胞反应,与对照组相比,Ig G和Ig G2a抗体水平显著提高,并且CD3^+CD4^+CD8^-和CD3^+CD8^+CD4^-T细胞百分比显著提高, pcDNA3.1-γ-giardin和pcDNA3.1-γ-δ-giardin免疫组的细胞因子IL-4和IFN-γ水平显著提高, pcDNA3.1-δ-giardin免疫组的IFN-γ水平显著提高。攻虫试验结果显示,接种pcDNA3.1-γ-giardin、pcDNA3.1-δ-giardin和pcDNA3.1-γ-δ-giardin基因疫苗的小鼠的减虫率分别为39.1%、26.1%和18.3%,单一DNA(γ-giardin或δ-giardin)质粒和多基因DNA(γ-δ-giardin)质粒均可以诱导小鼠产生一定的免疫保护力。
- 范琳琳朱伟宁石东东杨萱桐李晓云李巍
- 关键词：基因疫苗免疫保护力
- 长春地区兔的隐孢子虫分子流行病学调查被引量：3
- 2018年
- 为了对长春地区家兔的隐孢子虫感染情况进行分子流行病学调查,试验针对隐孢子虫基因中核糖体小亚基RNA（SSUrRNA）保守序列分别设计两对引物进行PCR扩增,建立检测家兔的隐孢子虫的巢式PCR方法,并对长春不同地区3个兔场149份家兔粪便样品进行流行病学调查。结果表明：本试验成功建立了兔隐孢子虫巢式PCR方法,特异性扩增出了大小为1 325 bp和830 bp的目的片段,利用建立的PCR方法检测出8份阳性样品,阳性率为5.37%,其中1份为微小隐孢子虫（C.parvum）,7份为兔隐孢子虫（C.cuniculus）。说明建立的巢式PCR方法具有较高的灵敏性和特异性,适合于临床应用,同时发现长春地区兔隐孢子虫感染存在人兽共患虫种。
- 邰利鑫林永超宫鹏涛李建华王一凡李巍张西臣
- 关键词：PCR扩增微小隐孢子虫巢式PCR
- 毕氏肠微孢子虫基因分型及公共卫生学重要性被引量：8
- 2014年
- 微孢子虫（Microsporidia）是一类细胞内专性寄生的真核生物,广泛存在于无脊椎动物如蜜蜂、蚕和几乎所有种类的脊椎动物中.在已知并被命名的1 200多个虫种中,共有8个属中的14个虫种可以感染人,其中毕氏肠微孢子虫（E.bieneusi）、兔脑炎微孢子虫（E.cuniculi）、肠脑炎微孢子虫（E.intestinalis）以及海伦脑炎微孢子虫（E.hellem）较为常见[1-3].E.bieneusi是感染人和动物最常见的病原体,能导致免疫妥协或低下者长期的致死性腹泻,也能够导致免疫功能正常者剧烈的自限性腹泻[2-3].
- 刁瑞南肖立华宋铭忻李巍
- 关键词：微孢子虫公共卫生学基因分型无脊椎动物免疫功能真核生物
- 三株不同毒力单增李斯特菌第一毒力岛基因全序列的克隆及遗传变异分析被引量：4
- 2013年
- 为分析单增李斯特菌重要毒力因子的遗传进化关系,并进一步探讨不同毒力菌株重要毒力因子的分子差异,分段扩增、克隆了3株不同毒力及不同血清型菌株的第1毒力岛(LIPI-1)全基因序列,对3株菌LIPI-1的6个毒力基因分别测序并进行了序列和系统进化分析。对其中毒力差异明显的2株菌,在分析其毒力表型的基础上,对其进行了分子特征和遗传变异分析。结果表明各毒力基因同源性各异,6个毒力基因反映出的进化关系不一致。弱毒株N21与强毒株Lmo0586相比,具有相似的溶血活性以及更强的溶脂活性。2株菌的调控序列prfA无明显差异;2株菌hly序列中的PEST基序有1个氨基酸发生了变化;2株菌的actA序列差异最显著,强毒株Lmo0586比弱毒株N21少105个核苷酸,造成35个氨基酸的缺失,该序列位于ActA蛋白的脯氨酸重复区内。
- 伊娜娜李巍张子群吕兴峰刘兵初纯明庞宇宋铭忻
- 关键词：单增李斯特菌遗传变异分析
- 旋毛虫p43与p53核酸疫苗的构建及其免疫保护性被引量：1
- 2013年
- 为探讨旋毛虫p43、p53基因的核酸疫苗对小鼠的免疫保护效果与免疫保护机制,将p43、p53基因分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,分3次肌肉注射免疫3组昆明小鼠。于三免后2周经口感染旋毛虫肌幼虫(100蚴/只),在攻虫后第7天和第35天剖杀小鼠,计算成虫减虫率、肌幼虫减虫率和繁殖力指数,评估其免疫效果。在各时间点上取小鼠血清用于检测抗体水平和脂肪酸结合蛋白(H-FABP)。结果显示,试验各组成虫减虫率与对照组相比差异显著(P<0.05),LPG及RCI减虫率与对照组相比均差异极显著(P<0.01);IgG抗体水平提高,与PBS组差异显著(P<0.05);各组H-FABP检测结果均低于70pg/mL。结果表明旋毛虫p43与p53基因的核酸疫苗具有较好的抗旋毛虫的免疫保护效果,且两核酸疫苗对小鼠心肌无损伤。
- 庞宇李巍韩彩霞伊娜娜刘畅俞昭旸宋铭忻
- 关键词：旋毛虫P43P53核酸疫苗免疫保护性
- 小鼠TLR2的克隆表达及生物学活性分析被引量：1
- 2013年
- 采用RT-PCR方法从小鼠巨噬细胞中扩增Toll样受体2(mTLR2)基因,得到基因全长CDS,经克隆测序正确后构建真核表达质粒pcDNA3.1-mTLR2。重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,分别用RT-PCR与免疫荧光检测其表达及细胞定位。利用TLR2激活物pam3csk4刺激转染重组质粒的HEK293T细胞后,用双荧光素酶报告基因系统分析其下游转录因子NF-κB的转录活性。结果显示,mTLR2转染后成功表达并定位于细胞膜,pam3csk4刺激后荧光素酶活性显著高于生理盐水对照组,说明表达的mTLR2具有野生型分子的功能。本研究成功克隆与表达了mTLR2基因且表达产物具有生物学活性,为研究TLR2信号通路及其在抗寄生虫感染中的作用奠定了基础。
- 俞昭旸李巍唐颖李兴超刘畅禹洋徐佳宋铭忻
- 关键词：TOLL样受体2真核表达核转录因子-ΚB
- 小鼠TLR2的克隆表达及生物学活性分析
- 采用RT-PCR方法从小鼠巨噬细胞中扩增Toll样受体2(mTLR2)基因,得到基因全长CDS,经克隆测序正确后构建真核表达质粒pcDNA3.1-mTLR2.重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,分别用RT-PCR与免疫荧...
- 宋铭忻路义鑫韩彩霞李巍李晓云俞昭旸王泽
- 旋毛虫p43与p53核酸疫苗的构建及其免疫保护性
- 为探讨旋毛虫p43、p53基因的核酸疫苗对小鼠的免疫保护效果与免疫保护机制,将p43、p53基因分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,分3次肌肉注射免疫3组昆明小鼠.于三免后2周经口感染旋毛虫肌幼虫(100蚴/...
- 宋铭忻路义鑫韩彩霞李巍李晓云庞宇王泽
- 旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂的表达及免疫相关性研究
- 寄生虫分泌的蛋白酶抑制剂是寄生虫与宿主间相互作用的重要分子.本研究根据GenBank上旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(KaSPI)基因编码序列设计特异性引物，进行RT-PCR扩增，将所获PCR产物克隆至pEASY-...
- 路义鑫宋铭忻韩彩霞李巍李晓云马静
