周小凯
- 作品数：9 被引量：4H指数：2
- 供职机构：西北民族大学更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金甘肃省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种基于RPA的牛病毒性腹泻病毒检测试剂盒及其应用
- 本发明提供用于检测牛病毒性腹泻病毒的引物对，所述引物对为：UTR‑F：5’‑GAGGCTAGCCATGCCCTTAGTAGGACTAGCAWA‑3’；UTR‑R：5’‑GGYYTCTGCWRCACCCTATCAGGCTG...
- 马忠仁马晓霞马鹏李明生曹欣常秋燕周小凯张德荣
- 文献传递
- 牛病毒性腹泻病毒GSTZ株E1基因原核表达载体的构建及表达
- 2017年
- 为研究牛病毒性腹泻病毒的囊膜糖蛋白E1的抗原性,参考了Oregon C24V BVDV毒株的基因组序列(AF091605.1),并设计一对特异引物(上游引物5’-CCC GGA TCC ATG GCC TCT CCC TAC TGT-3’,下游引物5’-GGG CTC GAG TTA CCC TTG TGC TCC TGT T-3’),利用RT-PCR从病毒基因组中扩增E1基因609 bp全长片段,测序结果表明,与C24V株核苷酸同源性达100%.扩增产物经BamHI和XhoI双酶切,亚克隆至原核表达载体,双酶切鉴定表明成功构建了重组表达载体pET-32a(+)-E1.重组表达载体转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,经SDSPAGE和Western-blot检测,成功诱导表达出25ku E1蛋白.实验结果为进一步研究BVDVE1蛋白的功能提供了参考.
- 谢军周昌娈周小凯周小凯马忠仁马晓霞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E1基因原核表达
- 流产衣原体CPAF基因的克隆序列分析及原核表达
- 2018年
- 为了研究流产衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的免疫原性,建立快速有效的流产衣原体抗体检测方法,根据Gen Bank中公布的流产衣原体基因组序列,设计并合成了流产衣原体CPAF蛋白编码基因的特异性引物,以流产衣原体标准菌株基因组为模板,经PCR扩增获得长度为1 809 bp目的基因片段;对获得的目的基因进行测序,并用生物信息学软件进行预测分析;再将该片段插入原核表达载体p ET-30a中,经双酶切、测序鉴定;构建成功的表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG对目的蛋白进行诱导表达,通过对诱导条件的优化,确定诱导表达的最佳条件,表达产物用SDS-PAGE和Western Blot检测。结果显示,成功克隆流产衣原体CPAF蛋白的编码基因,该编码产物可能是定位于宿主细胞质中的一种衣原体分泌性蛋白酶,分子内具有多个可能的抗原表位;重组表达质粒经IPTG诱导后,表达分子质量为67.6 ku的CPAF蛋白,该重组蛋白能与抗His-tag单克隆抗体以及流产衣原体阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。结果表明,以大肠杆菌表达系统重组表达的流产衣原体CPAF蛋白具有良好的免疫原性,可作为动物流产衣原体病的血清学诊断及亚单位疫苗研究的候选抗原。
- 刘萍马晓霞马晓霞马鹏周小凯李林杰马鹏马忠仁
- 关键词：流产衣原体克隆原核表达
- 内部核糖体进入位点介导核糖体翻译起始机制
- 2017年
- 部分正链RNA病毒基因的蛋白质合成是由其自身的内部核糖体进入位点(internal ribosomal entry site,IRES)以非依赖5’甲基化帽状结构来实现的。目前,IRES被分为4类,虽然这4类IRES在对其介导的基因合成目的蛋白的机制不同,但是这些不同蛋白翻译机制是依赖IRES与不同真核翻译起始因子相互作用形成特定的复合物来实现的。真核生物翻译是由起始tRNA(Met-tRNAMeti)/eIF2·GTP三元复合物引发,与翻译因子和40S小亚基结合形成43S复合物,43S复合物在eIF1A协助下与起始密码子结合形成48S复合物,在eIF5·GTP促进下60S亚基与40S亚基结合形成80S核糖体。IRES介导翻译通过eIF4G、IRES与eIF4A结合引导43S复合物与IRES结合。Ⅲ型IRES在无eIF3的参与下与40S小亚基的E位点结合并与eIF2·GTP/initiator tRNA形成48S亚基,在eIF5/eIF5B的调控下与60S亚基形成活化的核糖体进行蛋白质翻译。
- 马鹏周小凯常秋燕李林杰马晓霞马忠仁
- 关键词：核糖体内部核糖体进入位点
- 细胞受体介导的免疫信号通路研究进展
- 2017年
- 免疫系统的细胞是通过其表面多样化受体来实现感知外界环境的变化和其与其他细胞信息交流的。在这些细胞中,淋巴细胞抗原受体已经得到深入研究。目前,其他免疫细胞受体与淋巴细胞上其他受体的分子机制也已经被研究得很清楚了。细胞表面受体所运送的细胞外界信息是通过细胞膜来产生一系列的胞内生物化学事件。信号传输的形式多种多样,这种过程被称为信号转导,它可以将信号传输到细胞的特定部位,并且将其作用维持和调控至特定的部位。大多数信号的终点是细胞核和细胞骨架。信号到达细胞核就改变基因表达,产生一些新的蛋白质,像细胞因子、化学增活素和细胞黏附因子,从而使免疫细胞在机体免疫系统的正确调控下发挥免疫学功能。
- 周小凯徐文凯徐文凯李林杰马晓霞
- 关键词：免疫系统受体细胞膜信号传导信号分子
- 牦牛源BVDV非结构蛋白NS5A的原核表达及抗原表位分析
- 2022年
- 【目的】利用原核表达系统体外表达牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)NS5A基因,获得非结构蛋白NS5A,对其进行核苷酸、氨基酸序列分析,以解析BVDV非结构蛋白NS5A的功能。【方法】参考BVDV-1型毒株V006的NS5A基因序列(GenBank登录号:KX170647)设计并合成1对特异性引物,以分离到的牦牛BVDV GSTZ毒株cDNA为模板,PCR扩增NS5A基因片段,并克隆至表达载体pET-28a(+)中,构建重组原核表达载体pET28a-NS5A。经酶切初步鉴定及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,然后利用IPTG诱导表达。经10%SDS-PAGE电泳及Western blotting分析鉴定重组蛋白的表达,并根据NS5A基因的序列构建遗传发育进化树,利用DNAStar软件预测NS5A蛋白的亲水性、表面可塑性和抗原性等特性,并结合二级结构的预测对NS5A蛋白的B细胞抗原表位进行预测。【结果】PCR扩增NS5A目的基因片段为1488 bp,双酶切和测序鉴定结果证明,重组质粒pET28a-NS5A构建成功。经10%SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定重组蛋白,表达出了大小为55 ku的目的蛋白,大小与预期结果相符。通过对不同BVDV毒株NS5A基因序列构建遗传发育进化树,显示GSTZ毒株NS5A在遗传进化特征上属于BVDV-1型。NS5A蛋白的亲水性主要位于12—21、32—69、75—113、120—135、143—147、152—163、165—180、215—230、265—274、296—340、348—378、389—447、455—463、469—495位氨基酸处,表面可塑性主要位于14—18、37—42、76—81、86—109、154—160、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373、414—442、430—437、454—460位氨基酸处,柔性区域较多,主要位于14—21、37—43、67—82、86—93、97—110、152—158、169—179、218—231、240—255、296—310、313—328、344—359、364—373、413—422和472—483位氨基酸处。NS5A蛋白的B细胞抗原表位主要位于15—18、76—81、154—158、169—178、218—228、297—309、348�
- 王慧慧冯茜莉蒲飞洋李易聪汪梦竹周小凯赵泽阳马忠仁李倬马晓霞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS5A原核表达
- BVDV NS3D蛋白抗原位点分析及其对IRES介导的翻译调控机制的分析
- 牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）的非结构蛋白NS3对其他非结构蛋白的合成、病毒复制及促进宿主细胞凋亡过程中起着重要作用。BVDV开放阅读框的翻译依赖于上游非翻译区（5’...
- 周小凯
- 关键词：非结构蛋白NS3内部核糖体进入位点翻译调控
- 文献传递
- 病毒感染激活TLRs和RLRs介导的IFN信号通路研究进展被引量：2
- 2017年
- 在病毒侵染机体的过程中,机体的多数组织器官可以高效产生干扰素。近些年的研究发现,能够有效识别病毒侵染机体过程中的相关模式分子(例如病毒复制中间产物双链RNA)的细胞受体是产生干扰素的主要感受器,这些细胞受体(例如Toll样受体和RIG-Ⅰ样受体)能够诱发一系列的信号级联反应,并且被激活的感受器可以启动干扰素相关基因的转录活性,从而产生特定的干扰素。值得注意的是,不同种类的病毒能够倾向性地去激活特定的细胞感受器,并且产生特定的信号转导通路。论文主要从Toll样受体和RIG-Ⅰ样受体的结构入手,讨论宿主细胞模式受体在干扰素抗病毒过程中行使的功能,并简单介绍干扰素在抗病毒过程中的信号级联反应。
- 常秋燕周小凯马鹏马晓霞冯玉萍
- 关键词：RNA病毒感受器TOLL样受体信号通路
- 牛病毒性腹泻病毒分子生物学特性研究进展被引量：2
- 2017年
- 牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)是引起牛黏膜病的病原,该病原给养牛业造成重大的损失,致病机理十分复杂。与丙肝病毒同属黄病毒科,二者有很高的同源性,所以被用作HCV的模式病毒。其基因组为一单股正链RNA分子,编码4种结构蛋白和8种非结构蛋白,这些蛋白质在病毒的复制、翻译及与宿主细胞的相互作用中发挥重要作用。随着对该病毒及同属的其他病毒研究的深入,人们对该病毒的致病机制、免疫逃避、遗传特性等方面有了一定的认识。本文综述了该病毒及其同科病毒编码的蛋白质的主要功能,为该病的防治及其他病毒的深入研究提供参考依据。
- 周小凯周小凯田立马晓霞马忠仁
- 关键词：致病机理RNA病毒免疫逃避
