马晓霞
- 作品数：24 被引量：40H指数：4
- 供职机构：西北民族大学生命科学与工程学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金甘肃省科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- BVDV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法与RT-PCR方法的建立与应用被引量：3
- 2017年
- 利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法和RT-PCR方法建立2种有效地实验室检测牛病毒性腹泻病毒的方法。根据Gen Bank中登录的牛病毒性腹泻病毒基因序列,选取14株BVDVⅠ型和7株BVDVⅡ型,经序列比对后,设计合成1对特异性引物,建立了检测BVDV的RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。通过对RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性和重复性进行检测。结果显示,该方法可从BVDV标准毒株Oregon C24V中扩增出250 bp的特异性片段,对牛细小病毒、牛副流感病毒、牛腺病毒、呼肠孤病毒的扩增结果均为阴性,对BVDV C24V株、GSTZ株、Av69株、S183株和BVDVⅡ型扩增结果为阳性。经对标准毒株的细胞毒进行检测,RT-PCR的灵敏性为10-1TCID_(50)/mL,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的灵敏性为3.4×102copies/μL。应用2种方法对临床血清样本进行检测,结果比病毒分离方法更为敏感,操作简便。表明建立的RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法具有特异、灵敏、高效、快速的特点,可用于BVDV的流行病学监测、实验室检测以及诊断。
- 马鹏李林杰常秋燕王悦萦郭富城刘萍马晓霞马晓霞
- 关键词：RT-PCRSYBR
- 牛病毒性腹泻病毒GSTZ株E1基因原核表达载体的构建及表达
- 2017年
- 为研究牛病毒性腹泻病毒的囊膜糖蛋白E1的抗原性,参考了Oregon C24V BVDV毒株的基因组序列(AF091605.1),并设计一对特异引物(上游引物5’-CCC GGA TCC ATG GCC TCT CCC TAC TGT-3’,下游引物5’-GGG CTC GAG TTA CCC TTG TGC TCC TGT T-3’),利用RT-PCR从病毒基因组中扩增E1基因609 bp全长片段,测序结果表明,与C24V株核苷酸同源性达100%.扩增产物经BamHI和XhoI双酶切,亚克隆至原核表达载体,双酶切鉴定表明成功构建了重组表达载体pET-32a(+)-E1.重组表达载体转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,经SDSPAGE和Western-blot检测,成功诱导表达出25ku E1蛋白.实验结果为进一步研究BVDVE1蛋白的功能提供了参考.
- 谢军周昌娈周小凯周小凯马忠仁马晓霞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E1基因原核表达
- 流产衣原体CPAF基因的克隆序列分析及原核表达
- 2018年
- 为了研究流产衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的免疫原性,建立快速有效的流产衣原体抗体检测方法,根据Gen Bank中公布的流产衣原体基因组序列,设计并合成了流产衣原体CPAF蛋白编码基因的特异性引物,以流产衣原体标准菌株基因组为模板,经PCR扩增获得长度为1 809 bp目的基因片段;对获得的目的基因进行测序,并用生物信息学软件进行预测分析;再将该片段插入原核表达载体p ET-30a中,经双酶切、测序鉴定;构建成功的表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG对目的蛋白进行诱导表达,通过对诱导条件的优化,确定诱导表达的最佳条件,表达产物用SDS-PAGE和Western Blot检测。结果显示,成功克隆流产衣原体CPAF蛋白的编码基因,该编码产物可能是定位于宿主细胞质中的一种衣原体分泌性蛋白酶,分子内具有多个可能的抗原表位;重组表达质粒经IPTG诱导后,表达分子质量为67.6 ku的CPAF蛋白,该重组蛋白能与抗His-tag单克隆抗体以及流产衣原体阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。结果表明,以大肠杆菌表达系统重组表达的流产衣原体CPAF蛋白具有良好的免疫原性,可作为动物流产衣原体病的血清学诊断及亚单位疫苗研究的候选抗原。
- 刘萍马晓霞马晓霞马鹏周小凯李林杰马鹏马忠仁
- 关键词：流产衣原体克隆原核表达
- 单纯疱疹病毒感染过程中的免疫应答
- 2018年
- 单纯疱疹病毒(HSV)感染导致的非溶细胞免疫效应是其产生潜伏感染的基础。虽然处于潜伏期的HSV的复制是被抑制的,但HSV基因仍然存在于正常的神经细胞中。研究表明,宿主免疫应答在调节HSV潜伏感染或复制平衡中发挥着重要作用。论文概述了单纯疱疹病毒感染过程中天然免疫应答和适应性免疫应答的作用,以及干扰素和HSV毒力相关蛋白的作用,以期为深入了解HSV感染的分子机制提供参考。
- 李凌浩马鹏李林杰常秋燕郭富城王悦萦马忠仁李倬马晓霞
- 关键词：单纯疱疹病毒神经细胞免疫应答
- IFN-λ在抗病毒免疫中的作用被引量：2
- 2018年
- 免疫系统是机体抵抗病原体感染的第一道防线,它通过模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)来识别不同类别病原体的保守分子结构或在细菌与宿主细胞之间定位异常的分子。长期以来,人们普遍将Ⅰ型干扰素(Interferon—I,IFN-I)或IFN-α/β的产生作为机体对抗病毒感染的关键天然免疫防御反应。IFN-I主要通过抑制病毒复制来发挥直接的抗病毒活性,并且可以维持机体正常的天然免疫与适应性免疫系统的细胞免疫功能,因此IFN-I在病毒感染早期发挥抗病毒作用并且可以发挥长期免疫功能。
- 马晓霞马晓霞马鹏李林杰马鹏曹欣李林杰赵永清张德荣
- 关键词：抗病毒免疫IFN-Α细胞免疫功能病原体感染天然免疫
- 自噬相关蛋白参与抗病原感染机制的研究进展被引量：2
- 2018年
- 细胞自噬(Autophage),是细胞在自噬相关基因(Autophagy—related gene,ATG)的调控下利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程。细胞自噬与细胞凋亡、细胞衰老相似,是十分重要的生物学现象,参与生物的发育、生长等多种生命过程。
- 马鹏常秋燕李林杰郭富城李凌浩张德荣张德荣马忠仁
- 关键词：自噬病原大分子物质细胞器
- 内部核糖体进入位点介导核糖体翻译起始机制
- 2017年
- 部分正链RNA病毒基因的蛋白质合成是由其自身的内部核糖体进入位点(internal ribosomal entry site,IRES)以非依赖5’甲基化帽状结构来实现的。目前,IRES被分为4类,虽然这4类IRES在对其介导的基因合成目的蛋白的机制不同,但是这些不同蛋白翻译机制是依赖IRES与不同真核翻译起始因子相互作用形成特定的复合物来实现的。真核生物翻译是由起始tRNA(Met-tRNAMeti)/eIF2·GTP三元复合物引发,与翻译因子和40S小亚基结合形成43S复合物,43S复合物在eIF1A协助下与起始密码子结合形成48S复合物,在eIF5·GTP促进下60S亚基与40S亚基结合形成80S核糖体。IRES介导翻译通过eIF4G、IRES与eIF4A结合引导43S复合物与IRES结合。Ⅲ型IRES在无eIF3的参与下与40S小亚基的E位点结合并与eIF2·GTP/initiator tRNA形成48S亚基,在eIF5/eIF5B的调控下与60S亚基形成活化的核糖体进行蛋白质翻译。
- 马鹏周小凯常秋燕李林杰马晓霞马忠仁
- 关键词：核糖体内部核糖体进入位点
- 细胞受体介导的免疫信号通路研究进展
- 2017年
- 免疫系统的细胞是通过其表面多样化受体来实现感知外界环境的变化和其与其他细胞信息交流的。在这些细胞中,淋巴细胞抗原受体已经得到深入研究。目前,其他免疫细胞受体与淋巴细胞上其他受体的分子机制也已经被研究得很清楚了。细胞表面受体所运送的细胞外界信息是通过细胞膜来产生一系列的胞内生物化学事件。信号传输的形式多种多样,这种过程被称为信号转导,它可以将信号传输到细胞的特定部位,并且将其作用维持和调控至特定的部位。大多数信号的终点是细胞核和细胞骨架。信号到达细胞核就改变基因表达,产生一些新的蛋白质,像细胞因子、化学增活素和细胞黏附因子,从而使免疫细胞在机体免疫系统的正确调控下发挥免疫学功能。
- 周小凯徐文凯徐文凯李林杰马晓霞
- 关键词：免疫系统受体细胞膜信号传导信号分子
- 流感病毒感染中固有免疫和获得性免疫的研究进展
- 2023年
- 流感病毒一直以来是免疫学领域研究的重点目标。不仅仅是因为流感病毒在全球造成的危害,而且因为流感病毒感染机体后逃逸免疫系统的抗病毒反应的花样层出不穷。当流感病毒侵染宿主后,虽然免疫系统会通过固有免疫和获得性免疫进行全方位抗病毒反应,但是这些抗病毒反应同时也会使宿主自身受损。这需要研究人员除了不断探索机体免疫系统抵抗流感病毒侵染的免疫机制,从中搜寻治疗流感病毒感染的新靶点。同时,也要基于新的研究进展来兼顾治疗流感病毒感染患者的过程中,减小免疫系统对机体造成的免疫病理伤害。
- 高明阳胡欣妍吴玉湖杨宣叶王进千马忠仁马晓霞
- 关键词：流感病毒固有免疫获得性免疫抗病毒
- PPRV Nigeria75/1 H蛋白原核表达及抗原表位预测被引量：4
- 2018年
- 克隆并原核表达小反刍兽疫病毒弱毒疫苗株血凝素蛋白(H)全长基因,并通过生物信息学的方法预测其B抗原表位。根据NCBI中PPRV基因组序列中H基因序列(GenBank X74443)设计一对引物,采用RT-PCR方法扩增其全长;将扩增产物克隆至原核表达载体pET-32a后,转化至大肠杆菌E. coli Rosetta,经IPTG 37℃诱导表达目的蛋白;表达的目的蛋白经带His标签的镍离子蛋白纯化柱纯化后,进行Western Blot鉴定。利用DNAStar软件采用生物信息学的方法预测其H蛋白潜在的抗原表位。结果显示,质粒pET-32a-H经双酶切鉴定及测序后可证明构建正确;表达的目的蛋白相对分子质量约67 ku,能被抗His标签抗体识别,主要以包涵体形式存在,有少量可溶性表达。通过生物信息学软件DNAStar成功找到H蛋白的潜在抗原表位5-8,14-16,73-75,83-90,125-131,142-147,170-177,236-245,281-285,312-317,360-363,370-379,388-391,445-449,487-489,503-505,520-522,532-535,544-551,592-595。试验成功构建阳性质粒pET-32a-H,表达目的蛋白,并成功预测出H蛋白潜在的抗原表位。为早日消除PPRV研制新型亚单位疫苗提供参考。
- 李林杰常秋燕马鹏王悦萦马晓霞马晓霞
- 关键词：小反刍兽疫病毒原核表达B细胞抗原表位
